CAJ | 학술논문

建立了一种检测Ⅱ型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2)的实时荧光PCR(real-time fluorescence polymerase chain reaction)方法.用Primer Express2.0和Oligo6.0设计针对Ⅱ型猪链球菌荚膜抗原基因簇中cps2I基因的引物和Taqman荧光探针.通过常规PCR方法扩增得到81 bp DNA片段,克隆到pMD18-T载体,测序表明得到的序列为目的基因片段.在Lightcycler荧光PCR仪上对Ⅱ型猪链球菌的扩增曲线表明,该实时荧光PCR具有良好的特异性,可成功地扩增Ⅱ型猪链球菌,而参考猪链球菌(S.suis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureu)、志贺氏菌(Shigella)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytoge)和空白对照都是阴性;该检测方法可达到检测10个细菌的灵敏度,反应过程仅需30min完成;在两个不同时间检测同一浓度的菌液,每次做20个重复,2次检测所得的Ct(threshold,阈循环)值之间无统计学差异(P＞0.05),方法稳定性好.该实时荧光PCR检测Ⅱ型猪链球菌的方法可用于出入境检疫和动物防疫监督部门的疫情监测.
건립료일충검측Ⅱ형저련구균(Streptococcus suis serotype 2)적실시형광PCR(real-time fluorescence polymerase chain reaction)방법.용Primer Express2.0화Oligo6.0설계침대Ⅱ형저련구균협막항원기인족중cps2I기인적인물화Taqman형광탐침.통과상규PCR방법확증득도81 bp DNA편단,극륭도pMD18-T재체,측서표명득도적서렬위목적기인편단.재Lightcycler형광PCR의상대Ⅱ형저련구균적확증곡선표명,해실시형광PCR구유량호적특이성,가성공지확증Ⅱ형저련구균,이삼고저련구균(S.suis)、대장간균(Escherichia coli)、사문씨균(Salmonella)、금황색포도구균(Staphylococcus aureu)、지하씨균(Shigella)、단증리사특씨균(Listeria monocytoge)화공백대조도시음성;해검측방법가체도검측10개세균적령민도,반응과정부수30min완성;재량개불동시간검측동일농도적균액,매차주20개중복,2차검측소득적Ct(threshold,역순배)치지간무통계학차이(P＞0.05),방법은정성호.해실시형광PCR검측Ⅱ형저련구균적방법가용우출입경검역화동물방역감독부문적역정감측.