植物研究
植物研究
식물연구
BULLETIN OF BOTANICAL RESEARCH
2007年
1期
82-88
,共7页
胡杨%盐胁迫%cDNA文库%nhx
鬍楊%鹽脅迫%cDNA文庫%nhx
호양%염협박%cDNA문고%nhx
采用CTAB法提取经600 mmol·L-1 NaCl胁迫处理后的胡杨总RNA,利用SMART技术构建载体为λTriplEx2的盐胁迫条件下胡杨的表达型cDNA文库(SSL).文库的滴度为1.2×106 pfu·ml-1,重组率约为90.6%,扩增后的滴度为3×109 pfu·ml-1,容量约为2.4×1011.插入片段长度均大于400 bp,平均长度约为790 bp.从文库中随机挑选32个阳性克隆进行3′端测序,并将测序结果通过NCBI (National Center for Biotechnology Information) 数据库进行比较,发现有23个EST序列与已知序列有明显的同源性,而其余的与NCBI中的已知序列相似性较低(e值＞10-4),可能是未知基因.其中序列SSL061、SSL179与脱水素序列有较高的序列一致性.同时合成引物,通过PCR扩增文库的方法,从中筛选获得存在于植物细胞膜上并在植物受盐胁迫时起重要作用的nhx基因,进一步验证了文库的质量.
採用CTAB法提取經600 mmol·L-1 NaCl脅迫處理後的鬍楊總RNA,利用SMART技術構建載體為λTriplEx2的鹽脅迫條件下鬍楊的錶達型cDNA文庫(SSL).文庫的滴度為1.2×106 pfu·ml-1,重組率約為90.6%,擴增後的滴度為3×109 pfu·ml-1,容量約為2.4×1011.插入片段長度均大于400 bp,平均長度約為790 bp.從文庫中隨機挑選32箇暘性剋隆進行3′耑測序,併將測序結果通過NCBI (National Center for Biotechnology Information) 數據庫進行比較,髮現有23箇EST序列與已知序列有明顯的同源性,而其餘的與NCBI中的已知序列相似性較低(e值＞10-4),可能是未知基因.其中序列SSL061、SSL179與脫水素序列有較高的序列一緻性.同時閤成引物,通過PCR擴增文庫的方法,從中篩選穫得存在于植物細胞膜上併在植物受鹽脅迫時起重要作用的nhx基因,進一步驗證瞭文庫的質量.
채용CTAB법제취경600 mmol·L-1 NaCl협박처리후적호양총RNA,이용SMART기술구건재체위λTriplEx2적염협박조건하호양적표체형cDNA문고(SSL).문고적적도위1.2×106 pfu·ml-1,중조솔약위90.6%,확증후적적도위3×109 pfu·ml-1,용량약위2.4×1011.삽입편단장도균대우400 bp,평균장도약위790 bp.종문고중수궤도선32개양성극륭진행3′단측서,병장측서결과통과NCBI (National Center for Biotechnology Information) 수거고진행비교,발현유23개EST서렬여이지서렬유명현적동원성,이기여적여NCBI중적이지서렬상사성교저(e치＞10-4),가능시미지기인.기중서렬SSL061、SSL179여탈수소서렬유교고적서렬일치성.동시합성인물,통과PCR확증문고적방법,종중사선획득존재우식물세포막상병재식물수염협박시기중요작용적nhx기인,진일보험증료문고적질량.
