CAJ | 학술논문

背景:细胞因子具有免疫佐剂效应,但将其用作幽门螺杆菌(H.pylori)核酸疫苗佐剂的研究报道尚少.目的:构建同时含H.pylori尿素酶B亚单位(ureB)基因和小鼠白细胞介素-2(IL-2)基因的重组活减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,体外鉴定其表达蛋白的免疫原性,体内检测其对H.pylori感染的免疫保护作用.方法:以聚合酶链反应(PCR)扩增H.pylori ureB基因和小鼠IL-2基因,分别插入pUCmT载体,测序,通过一系列酶切、连接反应分别克隆入真核表达载体pIRES,酶切、PCR鉴定;重组质粒pIRES-ureB和pIRES-ureB-IL-2分别转化减毒鼠伤寒沙门菌LB5000,抽提质粒,进一步转化终宿主菌SL7207,反复传代培养.以LipofectamineTM2000将重组质粒分别体外转染COS-7细胞,蛋白质印迹法检测表达蛋白的免疫原性.以疫苗菌经口接种小鼠,4周后予H.pylori攻击,攻击后4周鉴定H. pylori感染状况.结果:测序结果显示扩增出的ureB和IL-2基因序列与GenBank中的H.pylori ureB和小鼠IL-2序列一致,酶切、PCR鉴定证实ureB和IL-2基因已克隆入pIRES载体,并成功构建了稳定的含H.pylori ureB和小鼠IL-2基因的重组活减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗.蛋白质印迹法显示,pIRES-ureB-IL-2转染的COS-7细胞表达特异性UreB和IL-2蛋白.体内实验显示,疫苗接种组小鼠的免疫保护率显著高于PBS对照组(P＜0.01),其中ureB-IL-2疫苗组又显著高于ureB疫苗组(87.5%对62.5%,P＜0.05).结论:成功构建了编码H.pylori ureB和免疫佐剂IL-2基因的重组活减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,体外实验证实其可表达具有免疫原性的抗原蛋白和佐剂蛋白,体内实验证实其对小鼠H. pylori感染具有免疫保护性,免疫佐剂IL-2可提高核酸疫苗的免疫保护率.
배경:세포인자구유면역좌제효응,단장기용작유문라간균(H.pylori)핵산역묘좌제적연구보도상소.목적:구건동시함H.pylori뇨소매B아단위(ureB)기인화소서백세포개소-2(IL-2)기인적중조활감독서상한사문균핵산역묘,체외감정기표체단백적면역원성,체내검측기대H.pylori감염적면역보호작용.방법:이취합매련반응(PCR)확증H.pylori ureB기인화소서IL-2기인,분별삽입pUCmT재체,측서,통과일계렬매절、련접반응분별극륭입진핵표체재체pIRES,매절、PCR감정;중조질립pIRES-ureB화pIRES-ureB-IL-2분별전화감독서상한사문균LB5000,추제질립,진일보전화종숙주균SL7207,반복전대배양.이LipofectamineTM2000장중조질립분별체외전염COS-7세포,단백질인적법검측표체단백적면역원성.이역묘균경구접충소서,4주후여H.pylori공격,공격후4주감정H. pylori감염상황.결과:측서결과현시확증출적ureB화IL-2기인서렬여GenBank중적H.pylori ureB화소서IL-2서렬일치,매절、PCR감정증실ureB화IL-2기인이극륭입pIRES재체,병성공구건료은정적함H.pylori ureB화소서IL-2기인적중조활감독서상한사문균핵산역묘.단백질인적법현시,pIRES-ureB-IL-2전염적COS-7세포표체특이성UreB화IL-2단백.체내실험현시,역묘접충조소서적면역보호솔현저고우PBS대조조(P＜0.01),기중ureB-IL-2역묘조우현저고우ureB역묘조(87.5%대62.5%,P＜0.05).결론:성공구건료편마H.pylori ureB화면역좌제IL-2기인적중조활감독서상한사문균핵산역묘,체외실험증실기가표체구유면역원성적항원단백화좌제단백,체내실험증실기대소서H. pylori감염구유면역보호성,면역좌제IL-2가제고핵산역묘적면역보호솔.