感染、炎症、修复
感染、炎癥、脩複
감염、염증、수복
INFECTION， INFLAMMATION， REPAIR
2009年
1期
6-10
,共5页
刘芸%邓鹏%刘铮%徐佳%吴向玲%姜勇
劉蕓%鄧鵬%劉錚%徐佳%吳嚮玲%薑勇
류예%산붕%류쟁%서가%오향령%강용
高迁移率族蛋白B1%细胞因子诱导片段1%链霉亲和素结合肽%钙调蛋白结合肽%质粒构建%肿瘤坏死因子-α
高遷移率族蛋白B1%細胞因子誘導片段1%鏈黴親和素結閤肽%鈣調蛋白結閤肽%質粒構建%腫瘤壞死因子-α
고천이솔족단백B1%세포인자유도편단1%련매친화소결합태%개조단백결합태%질립구건%종류배사인자-α
目的:构建高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中细胞因子诱导片段1(CIF1)与串联亲和纯化(TAP)系统中纯化标签链霉亲和素结合肽(SBP)和钙调蛋白结合肽(CBP)序列相融合的原核表达载体,观察重组蛋白对小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为HMGB1参与炎症反应作用机制的研究以及CIF1结构域细胞膜表面受体蛋白的获得和鉴定奠定基础.方法:采用PCR方法分别扩增出CBP-SBP和CIF1的编码序列,构建表达质粒pET-14b/CBP-SBP-CIF.利用Ni-NTA亲和树脂纯化融合蛋白,纯度达85%以上.采用纯化后的蛋白诱导小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞RAW 264.7,利用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测RAW264.7细胞释放TNF-α的水平变化.结果:表达载体构建正确,CIF1重组蛋白表达量高,纯度好.当蛋白浓度大于0.5 ng/μl时,CIF1重组蛋白诱导细胞TNF-α的分泌量与对照组相比差异具有显著性(P<0.05),并且在CIF1蛋白浓度0～2.5 ng/μl范围内,TNF-α的分泌量与CIF1重组蛋白的浓度呈显著的剂量依赖关系.结论:原核表达纯化了His-CBP-SBP-CIF1融合蛋白,该融合蛋白可以有效地作用于巨噬样细胞内的信号转导过程,介导了炎症因子TNF-α的分泌表达.
目的:構建高遷移率族蛋白B1(HMGB1)中細胞因子誘導片段1(CIF1)與串聯親和純化(TAP)繫統中純化標籤鏈黴親和素結閤肽(SBP)和鈣調蛋白結閤肽(CBP)序列相融閤的原覈錶達載體,觀察重組蛋白對小鼠單覈/巨噬細胞白血病細胞釋放腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的影響,為HMGB1參與炎癥反應作用機製的研究以及CIF1結構域細胞膜錶麵受體蛋白的穫得和鑒定奠定基礎.方法:採用PCR方法分彆擴增齣CBP-SBP和CIF1的編碼序列,構建錶達質粒pET-14b/CBP-SBP-CIF.利用Ni-NTA親和樹脂純化融閤蛋白,純度達85%以上.採用純化後的蛋白誘導小鼠單覈/巨噬細胞白血病細胞RAW 264.7,利用LiquiChip液相蛋白芯片繫統檢測RAW264.7細胞釋放TNF-α的水平變化.結果:錶達載體構建正確,CIF1重組蛋白錶達量高,純度好.噹蛋白濃度大于0.5 ng/μl時,CIF1重組蛋白誘導細胞TNF-α的分泌量與對照組相比差異具有顯著性(P<0.05),併且在CIF1蛋白濃度0～2.5 ng/μl範圍內,TNF-α的分泌量與CIF1重組蛋白的濃度呈顯著的劑量依賴關繫.結論:原覈錶達純化瞭His-CBP-SBP-CIF1融閤蛋白,該融閤蛋白可以有效地作用于巨噬樣細胞內的信號轉導過程,介導瞭炎癥因子TNF-α的分泌錶達.
목적:구건고천이솔족단백B1(HMGB1)중세포인자유도편단1(CIF1)여천련친화순화(TAP)계통중순화표첨련매친화소결합태(SBP)화개조단백결합태(CBP)서렬상융합적원핵표체재체,관찰중조단백대소서단핵/거서세포백혈병세포석방종류배사인자-α(TNF-α)적영향,위HMGB1삼여염증반응작용궤제적연구이급CIF1결구역세포막표면수체단백적획득화감정전정기출.방법:채용PCR방법분별확증출CBP-SBP화CIF1적편마서렬,구건표체질립pET-14b/CBP-SBP-CIF.이용Ni-NTA친화수지순화융합단백,순도체85%이상.채용순화후적단백유도소서단핵/거서세포백혈병세포RAW 264.7,이용LiquiChip액상단백심편계통검측RAW264.7세포석방TNF-α적수평변화.결과:표체재체구건정학,CIF1중조단백표체량고,순도호.당단백농도대우0.5 ng/μl시,CIF1중조단백유도세포TNF-α적분비량여대조조상비차이구유현저성(P<0.05),병차재CIF1단백농도0～2.5 ng/μl범위내,TNF-α적분비량여CIF1중조단백적농도정현저적제량의뢰관계.결론:원핵표체순화료His-CBP-SBP-CIF1융합단백,해융합단백가이유효지작용우거서양세포내적신호전도과정,개도료염증인자TNF-α적분비표체.
