CAJ | 학술논문

目的:观察乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MKK3)及其下游分子p38丝裂酶原活化的蛋白激酶(p38MAPK)的表达的影响,探讨相关的信号转导机制,及其对肝癌细胞生物学行为的影响.方法:分别将质粒pCDNA3.1及pCDNA3.1-HBx重组质粒经脂质体介导转染人肝癌细胞株HepG2,G418筛选培养,并用反转录PCR和Western blot鉴定,获得表达X蛋白的稳定细胞株HepG2-HBx和阴性对照细胞株HepG2-pCDNA3.1,以HepG2细胞株作空白对照.通过RT-PCR和Western blot检测上述三种细胞株中MKK3,p38MAPK在mRNA水平和蛋白水平的表达变化,并用细胞免疫荧光法检查磷酸化p38MAPK蛋白在细胞浆及细胞核中的变化;通过MTT实验检测三种细胞株的增殖情况.采用SPSS 12软件进行统计学分析.结果:MKK3在mRNA和总蛋白水平的表达在HepG2-HBx中均高于其他两组,其他两组无明显差异;p38MAPK在mRNA和总蛋白水平三组无明显差异,而其蛋白磷酸化水平和在核蛋白中的表达在HepG2-HBx中较其他两组升高;HepG2-HBx较其他两组细胞有更强的增殖能力.结论:HBx可以通过上调肝癌细胞中MKK3的表达,促进p38MAPK磷酸化和入核,从而进一步激活下游分子发挥生物活性.p38MAPK通路在HBx促进肝癌细胞的增殖中发挥重要作用.可能是导致HBV相关性肝癌与非HBV相关性肝癌临床特点及肿瘤生物学差异的机制之一.
목적:관찰을형간염병독X단백대간암세포중사렬원활화단백격매(MKK3)급기하유분자p38사렬매원활화적단백격매(p38MAPK)적표체적영향,탐토상관적신호전도궤제,급기대간암세포생물학행위적영향.방법:분별장질립pCDNA3.1급pCDNA3.1-HBx중조질립경지질체개도전염인간암세포주HepG2,G418사선배양,병용반전록PCR화Western blot감정,획득표체X단백적은정세포주HepG2-HBx화음성대조세포주HepG2-pCDNA3.1,이HepG2세포주작공백대조.통과RT-PCR화Western blot검측상술삼충세포주중MKK3,p38MAPK재mRNA수평화단백수평적표체변화,병용세포면역형광법검사린산화p38MAPK단백재세포장급세포핵중적변화;통과MTT실험검측삼충세포주적증식정황.채용SPSS 12연건진행통계학분석.결과:MKK3재mRNA화총단백수평적표체재HepG2-HBx중균고우기타량조,기타량조무명현차이;p38MAPK재mRNA화총단백수평삼조무명현차이,이기단백린산화수평화재핵단백중적표체재HepG2-HBx중교기타량조승고;HepG2-HBx교기타량조세포유경강적증식능력.결론:HBx가이통과상조간암세포중MKK3적표체,촉진p38MAPK린산화화입핵,종이진일보격활하유분자발휘생물활성.p38MAPK통로재HBx촉진간암세포적증식중발휘중요작용.가능시도치HBV상관성간암여비HBV상관성간암림상특점급종류생물학차이적궤제지일.