沈阳农业大学学报
瀋暘農業大學學報
침양농업대학학보
JOURNAL OF SHENYANG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2010年
5期
580-584
,共5页
王海峰%许文涛%苏春元%黄昆仑%罗云波%谷新晰%邱芳萍
王海峰%許文濤%囌春元%黃昆崙%囉雲波%穀新晰%邱芳萍
왕해봉%허문도%소춘원%황곤륜%라운파%곡신석%구방평
人源弹性蛋白酶%大肠杆菌%基因克隆%蛋白表达
人源彈性蛋白酶%大腸桿菌%基因剋隆%蛋白錶達
인원탄성단백매%대장간균%기인극륭%단백표체
从人体肾脏组织中提取的总RNA中通过反转录PCR(RT-PCR)扩增得到了ELA2B基因,并将其克隆到pGEM-T easy载体中.然后用限制性内切酶BamH Ⅰ和Hind Ⅲ对重组质粒pGEM-T easy/ELA2B和大肠杆菌E.coli表达质粒pET30a进行双酶切,成功构建了原核表达载体pET30a/ELA2B.将重组质粒转化大肠杆菌表达宿主BL21中,通过PCR和表型鉴定表明,ELA2B基因已经整合到大肠杆菌BL21染色体上.用IPTG对重组的大肠杆菌BL21进行诱导表达,得到的蛋白经SDS-PAGE分析结果表明:菌体中含有一明显特异性蛋白,大小为28 kD.经包涵体复性后在弹性蛋白酶活性检测平板上发现有代表弹性蛋白酶作用的透明圈产生,可初步证实表达产物具有生物活性.
從人體腎髒組織中提取的總RNA中通過反轉錄PCR(RT-PCR)擴增得到瞭ELA2B基因,併將其剋隆到pGEM-T easy載體中.然後用限製性內切酶BamH Ⅰ和Hind Ⅲ對重組質粒pGEM-T easy/ELA2B和大腸桿菌E.coli錶達質粒pET30a進行雙酶切,成功構建瞭原覈錶達載體pET30a/ELA2B.將重組質粒轉化大腸桿菌錶達宿主BL21中,通過PCR和錶型鑒定錶明,ELA2B基因已經整閤到大腸桿菌BL21染色體上.用IPTG對重組的大腸桿菌BL21進行誘導錶達,得到的蛋白經SDS-PAGE分析結果錶明:菌體中含有一明顯特異性蛋白,大小為28 kD.經包涵體複性後在彈性蛋白酶活性檢測平闆上髮現有代錶彈性蛋白酶作用的透明圈產生,可初步證實錶達產物具有生物活性.
종인체신장조직중제취적총RNA중통과반전록PCR(RT-PCR)확증득도료ELA2B기인,병장기극륭도pGEM-T easy재체중.연후용한제성내절매BamH Ⅰ화Hind Ⅲ대중조질립pGEM-T easy/ELA2B화대장간균E.coli표체질립pET30a진행쌍매절,성공구건료원핵표체재체pET30a/ELA2B.장중조질립전화대장간균표체숙주BL21중,통과PCR화표형감정표명,ELA2B기인이경정합도대장간균BL21염색체상.용IPTG대중조적대장간균BL21진행유도표체,득도적단백경SDS-PAGE분석결과표명:균체중함유일명현특이성단백,대소위28 kD.경포함체복성후재탄성단백매활성검측평판상발현유대표탄성단백매작용적투명권산생,가초보증실표체산물구유생물활성.
