中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2011年
3期
173-177
,共5页
李薇%刘晓萍%徐祥%谭艳%于业军%李艳君%任书亭%贾跃伟
李薇%劉曉萍%徐祥%譚豔%于業軍%李豔君%任書亭%賈躍偉
리미%류효평%서상%담염%우업군%리염군%임서정%가약위
腺病毒科%HeLa细胞%基因表达%质粒
腺病毒科%HeLa細胞%基因錶達%質粒
선병독과%HeLa세포%기인표체%질립
目的 构建携带Ubc9基因的重组腺病毒质粒pAdEasy-1/Ubc9,制备含13bc9基因的重组腺病毒Ad-Ubc9,并使Ubc9在HeLa细胞中高效表达.方法 PCR法扩增目的 Ubc9基因:用pemⅠ酶切将穿梭质粒pAdTrack-CMV-Ubc9线性化;将线性化的穿梭质粒pAdTrack-CMV-Ubc9与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在感受态BJ5183菌内进行同源重组,筛选阳性重组子pAdEasy-1/Ubc9;再用PacⅠ酶切pAdEasy-1/Ubc9使之线性化,线性化的重组腺病毒质粒经脂质体转染HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装和扩增.收集重组腺病毒,感染HeLa细胞,用Western blot方法检测Ubc9在HeLa细胞中的表达.结果 通过Pac Ⅰ酶切证实携带Uboc9基因的腺病毒载体构建成功,包装出携带Uboc9基因的腺病毒能有效感染HeLa细胞.结论 利用细菌内同源重组方法成功地构建了携带Ubc9的重组腺病毒载体,并能在HeLa细胞中高效表达.
目的 構建攜帶Ubc9基因的重組腺病毒質粒pAdEasy-1/Ubc9,製備含13bc9基因的重組腺病毒Ad-Ubc9,併使Ubc9在HeLa細胞中高效錶達.方法 PCR法擴增目的 Ubc9基因:用pemⅠ酶切將穿梭質粒pAdTrack-CMV-Ubc9線性化;將線性化的穿梭質粒pAdTrack-CMV-Ubc9與腺病毒骨架質粒pAdeasy-1在感受態BJ5183菌內進行同源重組,篩選暘性重組子pAdEasy-1/Ubc9;再用PacⅠ酶切pAdEasy-1/Ubc9使之線性化,線性化的重組腺病毒質粒經脂質體轉染HEK293細胞,進行重組腺病毒的包裝和擴增.收集重組腺病毒,感染HeLa細胞,用Western blot方法檢測Ubc9在HeLa細胞中的錶達.結果 通過Pac Ⅰ酶切證實攜帶Uboc9基因的腺病毒載體構建成功,包裝齣攜帶Uboc9基因的腺病毒能有效感染HeLa細胞.結論 利用細菌內同源重組方法成功地構建瞭攜帶Ubc9的重組腺病毒載體,併能在HeLa細胞中高效錶達.
목적 구건휴대Ubc9기인적중조선병독질립pAdEasy-1/Ubc9,제비함13bc9기인적중조선병독Ad-Ubc9,병사Ubc9재HeLa세포중고효표체.방법 PCR법확증목적 Ubc9기인:용pemⅠ매절장천사질립pAdTrack-CMV-Ubc9선성화;장선성화적천사질립pAdTrack-CMV-Ubc9여선병독골가질립pAdeasy-1재감수태BJ5183균내진행동원중조,사선양성중조자pAdEasy-1/Ubc9;재용PacⅠ매절pAdEasy-1/Ubc9사지선성화,선성화적중조선병독질립경지질체전염HEK293세포,진행중조선병독적포장화확증.수집중조선병독,감염HeLa세포,용Western blot방법검측Ubc9재HeLa세포중적표체.결과 통과Pac Ⅰ매절증실휴대Uboc9기인적선병독재체구건성공,포장출휴대Uboc9기인적선병독능유효감염HeLa세포.결론 이용세균내동원중조방법성공지구건료휴대Ubc9적중조선병독재체,병능재HeLa세포중고효표체.
