重庆师范大学学报（自然科学版）
重慶師範大學學報（自然科學版）
중경사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF CHONGQING NORMAL UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE EDITION）
2012年
1期
77-81
,共5页
李莹%陈斌%敬俊锋%何正波
李瑩%陳斌%敬俊鋒%何正波
리형%진빈%경준봉%하정파
纳豆激酶基因%大肠杆菌%克隆%表达
納豆激酶基因%大腸桿菌%剋隆%錶達
납두격매기인%대장간균%극륭%표체
纳豆激酶是一种良好的天然蛋白酶类溶栓物质.国内外许多学者对该酶进行了基因工程研究,但在克隆表达过程中出现了许多长短不同的基因片段.本研究通过原产日本的优质纳豆中分离鉴定出高产纳豆杆菌N07并提取该菌株的全基因组；通过PCR手段扩增出能编码纳豆激酶信号肽,前导肽和成熟肽的前纳豆激酶酶原基因NK1,以及能编码纳豆激酶成熟肽的纳豆激酶基因NK2,构建了纳豆激酶基因的表达载体pET30a-NK1和pET30a-NK2,转化E.coli BL21后在大肠杆菌中表达,并进行了活性分析.结果发现,纳豆激酶酶原基因片段NK1能成功表达出有活性的分泌型纳豆激酶；而纳豆激酶基因片段NK2的表达产物为无活性的包涵体.在对NK1和NK2的比较研究后可知,纳豆激酶酶原基因片段NK1能在大肠杆菌中很好的分泌表达,这将为纳豆激酶基因工程的深入研究奠定基础.
納豆激酶是一種良好的天然蛋白酶類溶栓物質.國內外許多學者對該酶進行瞭基因工程研究,但在剋隆錶達過程中齣現瞭許多長短不同的基因片段.本研究通過原產日本的優質納豆中分離鑒定齣高產納豆桿菌N07併提取該菌株的全基因組；通過PCR手段擴增齣能編碼納豆激酶信號肽,前導肽和成熟肽的前納豆激酶酶原基因NK1,以及能編碼納豆激酶成熟肽的納豆激酶基因NK2,構建瞭納豆激酶基因的錶達載體pET30a-NK1和pET30a-NK2,轉化E.coli BL21後在大腸桿菌中錶達,併進行瞭活性分析.結果髮現,納豆激酶酶原基因片段NK1能成功錶達齣有活性的分泌型納豆激酶；而納豆激酶基因片段NK2的錶達產物為無活性的包涵體.在對NK1和NK2的比較研究後可知,納豆激酶酶原基因片段NK1能在大腸桿菌中很好的分泌錶達,這將為納豆激酶基因工程的深入研究奠定基礎.
납두격매시일충량호적천연단백매류용전물질.국내외허다학자대해매진행료기인공정연구,단재극륭표체과정중출현료허다장단불동적기인편단.본연구통과원산일본적우질납두중분리감정출고산납두간균N07병제취해균주적전기인조；통과PCR수단확증출능편마납두격매신호태,전도태화성숙태적전납두격매매원기인NK1,이급능편마납두격매성숙태적납두격매기인NK2,구건료납두격매기인적표체재체pET30a-NK1화pET30a-NK2,전화E.coli BL21후재대장간균중표체,병진행료활성분석.결과발현,납두격매매원기인편단NK1능성공표체출유활성적분비형납두격매；이납두격매기인편단NK2적표체산물위무활성적포함체.재대NK1화NK2적비교연구후가지,납두격매매원기인편단NK1능재대장간균중흔호적분비표체,저장위납두격매기인공정적심입연구전정기출.
