CAJ | 학술논문

植物表达载体是将目的基因转化宿主细胞的媒介,载体构建是通过遗传转化方法开展基因功能鉴定与应用等研究的重要环节.以构建玉米谷氨酰胺合成酶基因(GS1)表达载体pCUbi1390-Ubi-GS1-35S EPSPS为例,研究简单、通用、高效的构建载体的方法.该方法目的片段和载体不需要酶切产生互补的黏性末端,只需通过在目的基因PCR上下游引物的5’端设计与线性载体两端有15个碱基的同源序列,根据序列的同源性,将目的基因插入载体中,通过PCR程序实现DNA重组.结果表明,正确构建了设计的转化载体,该方法大大简化了载体构建的过程,也适用于任何一个基于单酶切位点把外源DNA重组插入目标序列.
식물표체재체시장목적기인전화숙주세포적매개,재체구건시통과유전전화방법개전기인공능감정여응용등연구적중요배절.이구건옥미곡안선알합성매기인(GS1)표체재체pCUbi1390-Ubi-GS1-35S EPSPS위례,연구간단、통용、고효적구건재체적방법.해방법목적편단화재체불수요매절산생호보적점성말단,지수통과재목적기인PCR상하유인물적5’단설계여선성재체량단유15개감기적동원서렬,근거서렬적동원성,장목적기인삽입재체중,통과PCR정서실현DNA중조.결과표명,정학구건료설계적전화재체,해방법대대간화료재체구건적과정,야괄용우임하일개기우단매절위점파외원DNA중조삽입목표서렬.