农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2012年
8期
942-947
,共6页
李莹%鞠辉明%白立景%李奎%敖红
李瑩%鞠輝明%白立景%李奎%敖紅
리형%국휘명%백립경%리규%오홍
microRNA-378-1%microRNA%真核表达载体
microRNA-378-1%microRNA%真覈錶達載體
microRNA-378-1%microRNA%진핵표체재체
microRNA对细胞的增殖和分化有着重要的调节作用,从大白猪(Sus scrofa)基因组DNA上扩增microRNA-378-1前体序列,经Xho Ⅰ酶切后回收相应片段,连接到pEGP-miR载体中,构建重组载体pEGP-miR-378-1,转染猪胎儿成纤维细胞系(PEF),通过荧光观察转染效率及报告基因的表达效率,利用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)测定细胞内microRNA-378-1的表达活性.结果表明,成功地构建了重组载体pEGP-miR-378-1;荧光观察转染后的细胞,显示有较高的转染效率,报告基因有较高的表达效率;QRT-PCR结果显示,实验组和对照组microRNA-378-1表达显著提高,实验组和对照组细胞间差异极显著(P<0.01);为制备转基因动物研究microRNA-378-1功能提供技术平台.
microRNA對細胞的增殖和分化有著重要的調節作用,從大白豬(Sus scrofa)基因組DNA上擴增microRNA-378-1前體序列,經Xho Ⅰ酶切後迴收相應片段,連接到pEGP-miR載體中,構建重組載體pEGP-miR-378-1,轉染豬胎兒成纖維細胞繫(PEF),通過熒光觀察轉染效率及報告基因的錶達效率,利用實時熒光定量PCR(QRT-PCR)測定細胞內microRNA-378-1的錶達活性.結果錶明,成功地構建瞭重組載體pEGP-miR-378-1;熒光觀察轉染後的細胞,顯示有較高的轉染效率,報告基因有較高的錶達效率;QRT-PCR結果顯示,實驗組和對照組microRNA-378-1錶達顯著提高,實驗組和對照組細胞間差異極顯著(P<0.01);為製備轉基因動物研究microRNA-378-1功能提供技術平檯.
microRNA대세포적증식화분화유착중요적조절작용,종대백저(Sus scrofa)기인조DNA상확증microRNA-378-1전체서렬,경Xho Ⅰ매절후회수상응편단,련접도pEGP-miR재체중,구건중조재체pEGP-miR-378-1,전염저태인성섬유세포계(PEF),통과형광관찰전염효솔급보고기인적표체효솔,이용실시형광정량PCR(QRT-PCR)측정세포내microRNA-378-1적표체활성.결과표명,성공지구건료중조재체pEGP-miR-378-1;형광관찰전염후적세포,현시유교고적전염효솔,보고기인유교고적표체효솔;QRT-PCR결과현시,실험조화대조조microRNA-378-1표체현저제고,실험조화대조조세포간차이겁현저(P<0.01);위제비전기인동물연구microRNA-378-1공능제공기술평태.