细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2006年
1期
74-77
,共4页
王建丽%郑玉玲%王保莉%郭霭光%马茹%姜永强
王建麗%鄭玉玲%王保莉%郭靄光%馬茹%薑永彊
왕건려%정옥령%왕보리%곽애광%마여%강영강
单克隆抗体%B3%二硫键稳定单链抗体%PE38%肿瘤导向
單剋隆抗體%B3%二硫鍵穩定單鏈抗體%PE38%腫瘤導嚮
단극륭항체%B3%이류건은정단련항체%PE38%종류도향
目的:构建二硫键稳定单链抗体(B3dsscFv)融合PE38原核表达载体,实现其高效表达,并对初步纯化后的复性产物的稳定性、对肿瘤细胞的结合和杀伤活性进行测定.方法:重叠PCR连接B3抗体的VH和VL片段,并将PCR产物克隆至pET22b表达载体(B3dsscFv-pET22b).测序正确的PE38基因片段经酶切连接至B3dsscFv-pET22b,构建B3dsscFv-PE38-pET22b表达载体.IPTG诱导转化菌,将表达的包涵体进行变性、复性后用阳离子柱Q-Sepharose进行了初步纯化,ELISA测定此融合蛋白中单链抗体的结合活性及其在37℃的稳定性,并采用MTT法检测其对B3抗原表面阳性细胞HT-29的杀伤作用.结果:双酶切鉴定表明成功地构建了B3dsscFv-PE38-pET表达载体,表达产物以包涵体形式存在,占总蛋白量的45%左右.复性后的B3dsscFv-PE38保持单链抗体的结合活性,并且对结肠癌HT-29细胞具有一定的杀伤作用,最大杀伤率可达96%.该蛋白在37℃孵育16 h后,仍能保持大部分活性.结论:所获B3dsscFv-PE38免疫毒素具备导向和杀伤肿瘤细胞的双重功能和良好的稳定性,为其研制有效的肿瘤免疫治疗靶向药物提供一定的基础.
目的:構建二硫鍵穩定單鏈抗體(B3dsscFv)融閤PE38原覈錶達載體,實現其高效錶達,併對初步純化後的複性產物的穩定性、對腫瘤細胞的結閤和殺傷活性進行測定.方法:重疊PCR連接B3抗體的VH和VL片段,併將PCR產物剋隆至pET22b錶達載體(B3dsscFv-pET22b).測序正確的PE38基因片段經酶切連接至B3dsscFv-pET22b,構建B3dsscFv-PE38-pET22b錶達載體.IPTG誘導轉化菌,將錶達的包涵體進行變性、複性後用暘離子柱Q-Sepharose進行瞭初步純化,ELISA測定此融閤蛋白中單鏈抗體的結閤活性及其在37℃的穩定性,併採用MTT法檢測其對B3抗原錶麵暘性細胞HT-29的殺傷作用.結果:雙酶切鑒定錶明成功地構建瞭B3dsscFv-PE38-pET錶達載體,錶達產物以包涵體形式存在,佔總蛋白量的45%左右.複性後的B3dsscFv-PE38保持單鏈抗體的結閤活性,併且對結腸癌HT-29細胞具有一定的殺傷作用,最大殺傷率可達96%.該蛋白在37℃孵育16 h後,仍能保持大部分活性.結論:所穫B3dsscFv-PE38免疫毒素具備導嚮和殺傷腫瘤細胞的雙重功能和良好的穩定性,為其研製有效的腫瘤免疫治療靶嚮藥物提供一定的基礎.
목적:구건이류건은정단련항체(B3dsscFv)융합PE38원핵표체재체,실현기고효표체,병대초보순화후적복성산물적은정성、대종류세포적결합화살상활성진행측정.방법:중첩PCR련접B3항체적VH화VL편단,병장PCR산물극륭지pET22b표체재체(B3dsscFv-pET22b).측서정학적PE38기인편단경매절련접지B3dsscFv-pET22b,구건B3dsscFv-PE38-pET22b표체재체.IPTG유도전화균,장표체적포함체진행변성、복성후용양리자주Q-Sepharose진행료초보순화,ELISA측정차융합단백중단련항체적결합활성급기재37℃적은정성,병채용MTT법검측기대B3항원표면양성세포HT-29적살상작용.결과:쌍매절감정표명성공지구건료B3dsscFv-PE38-pET표체재체,표체산물이포함체형식존재,점총단백량적45%좌우.복성후적B3dsscFv-PE38보지단련항체적결합활성,병차대결장암HT-29세포구유일정적살상작용,최대살상솔가체96%.해단백재37℃부육16 h후,잉능보지대부분활성.결론:소획B3dsscFv-PE38면역독소구비도향화살상종류세포적쌍중공능화량호적은정성,위기연제유효적종류면역치료파향약물제공일정적기출.
