广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2008年
1期
46-48
,共3页
徐伟锋%朱惠明%宋洋%王娜%蔡筱彦%王立生
徐偉鋒%硃惠明%宋洋%王娜%蔡篠彥%王立生
서위봉%주혜명%송양%왕나%채소언%왕립생
凋亡素基因%腺病毒%胃癌细胞
凋亡素基因%腺病毒%胃癌細胞
조망소기인%선병독%위암세포
目的 探讨带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的重组腺病毒载体介导的凋亡素(VP3)基因对人胃癌细胞的致凋亡作用.方法 在HEK293细胞中包装Ad-EGFP-VP3和Ad-EGFP两种腺病毒,大量扩增,并测定两种腺病毒滴度.以MOI=20感染人胃癌细胞,12,24,48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达;用Hoechst33258试剂盒染色,观察凋亡形态学改变.24 h后用RT-PCR检测VP3基因的表达.6,12,24,48,72 h后用FCM检测胃癌细胞的凋亡率.结果 Ad-EGFP-VP3滴度为2.4×108 pfu/ml,Ad-EGFP滴度为2.1×108pfu/ml.Hoechst33528染色显示Ad-EGFP-VP3感染的胃癌细胞出现凋亡形态学改变.RT-PCR检测仅有Ad-EGFP-VP3感染的胃癌细胞表达VP3基因的mRNA.FCM检测Ad-EGFP-VP3感染人胃癌细胞12 h后凋亡率达51.7%.结论带有EGFP标记的重组腺病毒载体介导VP3基因导入胃癌细胞后,能有效诱导胃癌细胞凋亡.
目的 探討帶有增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)標記的重組腺病毒載體介導的凋亡素(VP3)基因對人胃癌細胞的緻凋亡作用.方法 在HEK293細胞中包裝Ad-EGFP-VP3和Ad-EGFP兩種腺病毒,大量擴增,併測定兩種腺病毒滴度.以MOI=20感染人胃癌細胞,12,24,48 h後在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白錶達;用Hoechst33258試劑盒染色,觀察凋亡形態學改變.24 h後用RT-PCR檢測VP3基因的錶達.6,12,24,48,72 h後用FCM檢測胃癌細胞的凋亡率.結果 Ad-EGFP-VP3滴度為2.4×108 pfu/ml,Ad-EGFP滴度為2.1×108pfu/ml.Hoechst33528染色顯示Ad-EGFP-VP3感染的胃癌細胞齣現凋亡形態學改變.RT-PCR檢測僅有Ad-EGFP-VP3感染的胃癌細胞錶達VP3基因的mRNA.FCM檢測Ad-EGFP-VP3感染人胃癌細胞12 h後凋亡率達51.7%.結論帶有EGFP標記的重組腺病毒載體介導VP3基因導入胃癌細胞後,能有效誘導胃癌細胞凋亡.
목적 탐토대유증강형록색형광단백(EGFP)표기적중조선병독재체개도적조망소(VP3)기인대인위암세포적치조망작용.방법 재HEK293세포중포장Ad-EGFP-VP3화Ad-EGFP량충선병독,대량확증,병측정량충선병독적도.이MOI=20감염인위암세포,12,24,48 h후재형광현미경하관찰록색형광단백표체;용Hoechst33258시제합염색,관찰조망형태학개변.24 h후용RT-PCR검측VP3기인적표체.6,12,24,48,72 h후용FCM검측위암세포적조망솔.결과 Ad-EGFP-VP3적도위2.4×108 pfu/ml,Ad-EGFP적도위2.1×108pfu/ml.Hoechst33528염색현시Ad-EGFP-VP3감염적위암세포출현조망형태학개변.RT-PCR검측부유Ad-EGFP-VP3감염적위암세포표체VP3기인적mRNA.FCM검측Ad-EGFP-VP3감염인위암세포12 h후조망솔체51.7%.결론대유EGFP표기적중조선병독재체개도VP3기인도입위암세포후,능유효유도위암세포조망.
