河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
3期
112-115
,共4页
祁艳华%王爱萍%李学伍%游雷鸣%史平玲%胡峰%张改平
祁豔華%王愛萍%李學伍%遊雷鳴%史平玲%鬍峰%張改平
기염화%왕애평%리학오%유뢰명%사평령%호봉%장개평
猪圆环病毒2型%ORF2基因%克隆%原核表达
豬圓環病毒2型%ORF2基因%剋隆%原覈錶達
저원배병독2형%ORF2기인%극륭%원핵표체
为在原核表达系统中表达猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因片段,提取感染PCV2的细胞基因组DNA,PCR扩增ORF2基因片段并克隆至pMD-18T载体上,经PCR、酶切及测序鉴定后,将该基因重组至pET-28a原核表达载体,构建了表达载体pET-28a-ORF2.该重组质粒在大肠杆菌BL21中经1mmol/L IPTG于37℃诱导5h得到最佳表达.表达重组蛋白的分子量为26.0kD,以包涵体形式存在.Western-Blot分析表明,该重组蛋白与PCV2阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的反应原性.
為在原覈錶達繫統中錶達豬圓環病毒2型(PCV2)ORF2基因片段,提取感染PCV2的細胞基因組DNA,PCR擴增ORF2基因片段併剋隆至pMD-18T載體上,經PCR、酶切及測序鑒定後,將該基因重組至pET-28a原覈錶達載體,構建瞭錶達載體pET-28a-ORF2.該重組質粒在大腸桿菌BL21中經1mmol/L IPTG于37℃誘導5h得到最佳錶達.錶達重組蛋白的分子量為26.0kD,以包涵體形式存在.Western-Blot分析錶明,該重組蛋白與PCV2暘性血清髮生特異性反應,錶明該重組蛋白具有良好的反應原性.
위재원핵표체계통중표체저원배병독2형(PCV2)ORF2기인편단,제취감염PCV2적세포기인조DNA,PCR확증ORF2기인편단병극륭지pMD-18T재체상,경PCR、매절급측서감정후,장해기인중조지pET-28a원핵표체재체,구건료표체재체pET-28a-ORF2.해중조질립재대장간균BL21중경1mmol/L IPTG우37℃유도5h득도최가표체.표체중조단백적분자량위26.0kD,이포함체형식존재.Western-Blot분석표명,해중조단백여PCV2양성혈청발생특이성반응,표명해중조단백구유량호적반응원성.
