温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2010年
3期
231-234,238
,共5页
朱载华%孙莉%陈丹%张乾坤%嘉婷%邹正平%朱小春
硃載華%孫莉%陳丹%張乾坤%嘉婷%鄒正平%硃小春
주재화%손리%진단%장건곤%가정%추정평%주소춘
系统性红斑狼疮%三氧化二砷%γ-干扰素%甲基化%小鼠
繫統性紅斑狼瘡%三氧化二砷%γ-榦擾素%甲基化%小鼠
계통성홍반랑창%삼양화이신%γ-간우소%갑기화%소서
目的:观察三氧化二砷(ATO)对MRL/1pr狼疮小鼠脾脏CD4+T细胞IFN-γ基因启动子甲基化的影响.方法:免疫磁珠法分选16～18周MRL/1pr狼疮小鼠和C57BL/6J正常对照小鼠脾脏CD4+T细胞,PHA-p(20μg/mL)和IL-2(1000 IU/mL)刺激48 h后分为以下不同药物处理组:①PBS组:空白对照;②ATO组:1μmol/L ATO作用24 h;③ATO+5-氮杂胞苷(5-AzaC)组:1μmol/L 5-AzaC作用72 h后1μmol/L AT0作用24 h.CD4+T细胞经过以上处理后抽提基因组DNA,亚硫酸氢盐修饰,PCR扩增IFN-γ基因启动子,产物凝胶回收,克隆入pMD-19T载体,转化入E.coli DH5 α,筛选阳性克隆测序,测序结果采用生物信息学软件进行分析.结果:①MRL/1pr小鼠脾脏CD4+T细胞IFN-γ基因启动子呈低甲基化水平.②1 μmol/LATO作用24 h后MRL/1pr小鼠脾脏CD4+T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平明显增高.③1 μmol/L ATO作用24 h能使经过5-AzaC干预后的MRL/1pr小鼠脾脏CD4+T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平明显增高.结论:1 μmol/L ATO作用24 h能在一定程度上有效逆转活化状态下MRL/1pr小鼠脾脏CD4+T细胞IFN-γ基因启动子低甲基化.
目的:觀察三氧化二砷(ATO)對MRL/1pr狼瘡小鼠脾髒CD4+T細胞IFN-γ基因啟動子甲基化的影響.方法:免疫磁珠法分選16～18週MRL/1pr狼瘡小鼠和C57BL/6J正常對照小鼠脾髒CD4+T細胞,PHA-p(20μg/mL)和IL-2(1000 IU/mL)刺激48 h後分為以下不同藥物處理組:①PBS組:空白對照;②ATO組:1μmol/L ATO作用24 h;③ATO+5-氮雜胞苷(5-AzaC)組:1μmol/L 5-AzaC作用72 h後1μmol/L AT0作用24 h.CD4+T細胞經過以上處理後抽提基因組DNA,亞硫痠氫鹽脩飾,PCR擴增IFN-γ基因啟動子,產物凝膠迴收,剋隆入pMD-19T載體,轉化入E.coli DH5 α,篩選暘性剋隆測序,測序結果採用生物信息學軟件進行分析.結果:①MRL/1pr小鼠脾髒CD4+T細胞IFN-γ基因啟動子呈低甲基化水平.②1 μmol/LATO作用24 h後MRL/1pr小鼠脾髒CD4+T細胞IFN-γ基因啟動子甲基化水平明顯增高.③1 μmol/L ATO作用24 h能使經過5-AzaC榦預後的MRL/1pr小鼠脾髒CD4+T細胞IFN-γ基因啟動子甲基化水平明顯增高.結論:1 μmol/L ATO作用24 h能在一定程度上有效逆轉活化狀態下MRL/1pr小鼠脾髒CD4+T細胞IFN-γ基因啟動子低甲基化.
목적:관찰삼양화이신(ATO)대MRL/1pr랑창소서비장CD4+T세포IFN-γ기인계동자갑기화적영향.방법:면역자주법분선16～18주MRL/1pr랑창소서화C57BL/6J정상대조소서비장CD4+T세포,PHA-p(20μg/mL)화IL-2(1000 IU/mL)자격48 h후분위이하불동약물처리조:①PBS조:공백대조;②ATO조:1μmol/L ATO작용24 h;③ATO+5-담잡포감(5-AzaC)조:1μmol/L 5-AzaC작용72 h후1μmol/L AT0작용24 h.CD4+T세포경과이상처리후추제기인조DNA,아류산경염수식,PCR확증IFN-γ기인계동자,산물응효회수,극륭입pMD-19T재체,전화입E.coli DH5 α,사선양성극륭측서,측서결과채용생물신식학연건진행분석.결과:①MRL/1pr소서비장CD4+T세포IFN-γ기인계동자정저갑기화수평.②1 μmol/LATO작용24 h후MRL/1pr소서비장CD4+T세포IFN-γ기인계동자갑기화수평명현증고.③1 μmol/L ATO작용24 h능사경과5-AzaC간예후적MRL/1pr소서비장CD4+T세포IFN-γ기인계동자갑기화수평명현증고.결론:1 μmol/L ATO작용24 h능재일정정도상유효역전활화상태하MRL/1pr소서비장CD4+T세포IFN-γ기인계동자저갑기화.
