实用检验医师杂志
實用檢驗醫師雜誌
실용검험의사잡지
Chinese Journal of Laboratory Pathologist
2011年
4期
215-219
,共5页
缪应新%甘洁民%施泓%陈洁%周晓倩%赵虎
繆應新%甘潔民%施泓%陳潔%週曉倩%趙虎
무응신%감길민%시홍%진길%주효천%조호
聚合酶链反应%连接酶反应%单核苷酸多态性%瘦素受体基因%脂联素基因%护骨素基因
聚閤酶鏈反應%連接酶反應%單覈苷痠多態性%瘦素受體基因%脂聯素基因%護骨素基因
취합매련반응%련접매반응%단핵감산다태성%수소수체기인%지련소기인%호골소기인
目的 利用聚合酶链反应-连接酶反应(polymorphism chain reaction-ligase detection reaction,PCR-LDR)技术检测瘦素受体基因Lys109Arg (A/G)、Gln223Arg (A/G),脂联素基因G276T、T45G,护骨素基因T950C、G1181C六个多态性位点的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP).方法 参照待测多态性位点所在DNA序列设计并合成一对引物及3条探针,先通过PCR反应获得含有待检测突变位点的基因片段,再进行LDR,根据测序电泳结果所显示的含荧光标记的LDR产物的片段长度来判断基因型别.结果 采用PCR技术成功扩增出包含瘦素受体基因(110 bp,130 bp)、脂联素基因(400 bp)、护骨素基因(118 bp,163 bp)多态性位点的基因片段.根据LDR产物片段长度不同进行基因分型,纯合子只有一种片段长度,杂合子包含两种纯合子的片段长度,如瘦素受体基因SNP Lys109Arg (A/G)的PCR产物长度为110 bp,LDR产物片段的长度为110 bp时则判断为AA基因型,112 bp则判断为GG基因型,AG基因型则具有110 bp、112 bp两种片段长度.PCR-LDR基因分型结果与DNA测序技术的检测结果一致(Kappa=1,P=0.00).结论 PCR-LDR技术简单、快速、准确、成本低,适用于大批量SNP检测.
目的 利用聚閤酶鏈反應-連接酶反應(polymorphism chain reaction-ligase detection reaction,PCR-LDR)技術檢測瘦素受體基因Lys109Arg (A/G)、Gln223Arg (A/G),脂聯素基因G276T、T45G,護骨素基因T950C、G1181C六箇多態性位點的單覈苷痠多態性(single nucleotide polymorphism,SNP).方法 參照待測多態性位點所在DNA序列設計併閤成一對引物及3條探針,先通過PCR反應穫得含有待檢測突變位點的基因片段,再進行LDR,根據測序電泳結果所顯示的含熒光標記的LDR產物的片段長度來判斷基因型彆.結果 採用PCR技術成功擴增齣包含瘦素受體基因(110 bp,130 bp)、脂聯素基因(400 bp)、護骨素基因(118 bp,163 bp)多態性位點的基因片段.根據LDR產物片段長度不同進行基因分型,純閤子隻有一種片段長度,雜閤子包含兩種純閤子的片段長度,如瘦素受體基因SNP Lys109Arg (A/G)的PCR產物長度為110 bp,LDR產物片段的長度為110 bp時則判斷為AA基因型,112 bp則判斷為GG基因型,AG基因型則具有110 bp、112 bp兩種片段長度.PCR-LDR基因分型結果與DNA測序技術的檢測結果一緻(Kappa=1,P=0.00).結論 PCR-LDR技術簡單、快速、準確、成本低,適用于大批量SNP檢測.
목적 이용취합매련반응-련접매반응(polymorphism chain reaction-ligase detection reaction,PCR-LDR)기술검측수소수체기인Lys109Arg (A/G)、Gln223Arg (A/G),지련소기인G276T、T45G,호골소기인T950C、G1181C륙개다태성위점적단핵감산다태성(single nucleotide polymorphism,SNP).방법 삼조대측다태성위점소재DNA서렬설계병합성일대인물급3조탐침,선통과PCR반응획득함유대검측돌변위점적기인편단,재진행LDR,근거측서전영결과소현시적함형광표기적LDR산물적편단장도래판단기인형별.결과 채용PCR기술성공확증출포함수소수체기인(110 bp,130 bp)、지련소기인(400 bp)、호골소기인(118 bp,163 bp)다태성위점적기인편단.근거LDR산물편단장도불동진행기인분형,순합자지유일충편단장도,잡합자포함량충순합자적편단장도,여수소수체기인SNP Lys109Arg (A/G)적PCR산물장도위110 bp,LDR산물편단적장도위110 bp시칙판단위AA기인형,112 bp칙판단위GG기인형,AG기인형칙구유110 bp、112 bp량충편단장도.PCR-LDR기인분형결과여DNA측서기술적검측결과일치(Kappa=1,P=0.00).결론 PCR-LDR기술간단、쾌속、준학、성본저,괄용우대비량SNP검측.
