第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2000年
12期
1447-1450
,共4页
孙强%王冀姝%陈萍%柳天平%牛利国%韩骅%苏成芝
孫彊%王冀姝%陳萍%柳天平%牛利國%韓驊%囌成芝
손강%왕기주%진평%류천평%우리국%한화%소성지
蔗糖转换酶%同源重组%(V)突变%(V)信号肽
蔗糖轉換酶%同源重組%(V)突變%(V)信號肽
자당전환매%동원중조%(V)돌변%(V)신호태
目的克隆酿酒酵母的蔗糖转换酶基因(suc2),并定位突变酵母基因组中的suc2基因以获得无蔗糖转换酶表达的酵母品系.方法用P CR法从酵母Y190基因组中扩增出suc2 的成熟肽基因片段,克隆后测序.将色氨酸合成酶(TRP)基因片段插入suc2基因中, 构建成用于同源重组的suc2基因定位突变载体.导入酵母Y190,用营养缺陷筛选出suc2 基因突变的克隆.用PCR扩增并克隆突变后的suc2基因,用序列分析确定同源重组的发生.结果用 PCR从酵母基因组DNA中扩增出大小约1.5 kb的suc2基因片段,序列测定表明除585位有一点突变(AAC变为AAT)外,所得suc2基因与文献报道相同;构建的定位突变载体导入酵母细胞后 ,得到4株营养型符合的突变体;PCR表明这些突变体中均有suc2基因的同源重组;取其中1株的PCR产物进行序列测定证实了同源重组的发生.结论克隆了正确的编码蔗糖转换酶成熟肽的suc2基因片段;用同源重组方法在酵母Y190的基因组中定位突变了suc2基因 .
目的剋隆釀酒酵母的蔗糖轉換酶基因(suc2),併定位突變酵母基因組中的suc2基因以穫得無蔗糖轉換酶錶達的酵母品繫.方法用P CR法從酵母Y190基因組中擴增齣suc2 的成熟肽基因片段,剋隆後測序.將色氨痠閤成酶(TRP)基因片段插入suc2基因中, 構建成用于同源重組的suc2基因定位突變載體.導入酵母Y190,用營養缺陷篩選齣suc2 基因突變的剋隆.用PCR擴增併剋隆突變後的suc2基因,用序列分析確定同源重組的髮生.結果用 PCR從酵母基因組DNA中擴增齣大小約1.5 kb的suc2基因片段,序列測定錶明除585位有一點突變(AAC變為AAT)外,所得suc2基因與文獻報道相同;構建的定位突變載體導入酵母細胞後 ,得到4株營養型符閤的突變體;PCR錶明這些突變體中均有suc2基因的同源重組;取其中1株的PCR產物進行序列測定證實瞭同源重組的髮生.結論剋隆瞭正確的編碼蔗糖轉換酶成熟肽的suc2基因片段;用同源重組方法在酵母Y190的基因組中定位突變瞭suc2基因 .
목적극륭양주효모적자당전환매기인(suc2),병정위돌변효모기인조중적suc2기인이획득무자당전환매표체적효모품계.방법용P CR법종효모Y190기인조중확증출suc2 적성숙태기인편단,극륭후측서.장색안산합성매(TRP)기인편단삽입suc2기인중, 구건성용우동원중조적suc2기인정위돌변재체.도입효모Y190,용영양결함사선출suc2 기인돌변적극륭.용PCR확증병극륭돌변후적suc2기인,용서렬분석학정동원중조적발생.결과용 PCR종효모기인조DNA중확증출대소약1.5 kb적suc2기인편단,서렬측정표명제585위유일점돌변(AAC변위AAT)외,소득suc2기인여문헌보도상동;구건적정위돌변재체도입효모세포후 ,득도4주영양형부합적돌변체;PCR표명저사돌변체중균유suc2기인적동원중조;취기중1주적PCR산물진행서렬측정증실료동원중조적발생.결론극륭료정학적편마자당전환매성숙태적suc2기인편단;용동원중조방법재효모Y190적기인조중정위돌변료suc2기인 .
