CAJ | 학술논문

目的:建立Dicer mRNA 表达量检测的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)系统,检测肝癌细胞系与20例原发性肝细胞癌(primary hepatocellular carcinoma,PHC)组织中Dicer mRNA的表达水平.方法:根据Dicer mRNA的全序列设计特异性引物,结合荧光染料SYBR Green Ⅰ,RT-PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度, 进行熔解曲线分析排除非特异性扩增,根据标准品绘制标准曲线,由软件自动计算出待测样品Dicer mRNA的准确含量,并以Dicer mRNA和18S rRNA含量的比值作为Dicer表达水平的指标.结果:该方法检测的线性范围为5×102～5×109 copies/μl,样本的批内变异系数与批间变异系数为4.13%～19.72%和6.25%～18.76%.Dicer mRNA在HBV阳性肝癌细胞系HepG2.2.15和HBV阴性肝癌细胞系HepG2的表达水平明显低于正常肝细胞系WRL-68(P＜0.05);在PHC组织的表达水平明显低于癌旁配对组织(P＜0.05).结论:该方法具有较好的灵敏度、特异性和重复性.Dicer mRNA 表达量在肝癌细胞系和PHC组织中的检测为以后更好的研究PHC的发病机制奠定了理论基础.
목적:건립Dicer mRNA 표체량검측적실시형광정량역전록취합매련반응(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)계통,검측간암세포계여20례원발성간세포암(primary hepatocellular carcinoma,PHC)조직중Dicer mRNA적표체수평.방법:근거Dicer mRNA적전서렬설계특이성인물,결합형광염료SYBR Green Ⅰ,RT-PCR확증목적편단병실시검측산물적형광강도, 진행용해곡선분석배제비특이성확증,근거표준품회제표준곡선,유연건자동계산출대측양품Dicer mRNA적준학함량,병이Dicer mRNA화18S rRNA함량적비치작위Dicer표체수평적지표.결과:해방법검측적선성범위위5×102～5×109 copies/μl,양본적비내변이계수여비간변이계수위4.13%～19.72%화6.25%～18.76%.Dicer mRNA재HBV양성간암세포계HepG2.2.15화HBV음성간암세포계HepG2적표체수평명현저우정상간세포계WRL-68(P＜0.05);재PHC조직적표체수평명현저우암방배대조직(P＜0.05).결론:해방법구유교호적령민도、특이성화중복성.Dicer mRNA 표체량재간암세포계화PHC조직중적검측위이후경호적연구PHC적발병궤제전정료이론기출.