CAJ | 학술논문

目的:建立基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndostatin的质量控制方法.方法:分别建立腺病毒蛋白鉴定、腺病毒基因组鉴定、人内皮抑素(hEndostatin)基因鉴定、人内皮抑素表达量检测、腺病毒颗粒数测定、腺病毒滴度和比滴度测定、纯度测定、野生型腺病毒(AdWT)检测、残余宿主DNA含量检测和牛血清蛋白残余量检测等腺病毒质量控制项目的方法,并对纯化的腺病毒样品进行初步检测.结果:建立用SDS-PAGE方法对腺病毒进行蛋白鉴定,用限制性内切酶图谱分析的方法对腺病毒进行基因组鉴定,用PCR方法鉴定人内皮抑素基因,用ELISA方法检测人内皮抑素表达量,用D260法和HPLC方法进行腺病毒颗粒数测定,用D260/D280方法和HPLC方法进行纯度检测,用PCR方法进行野生型腺病毒检测,用杂交方法进行残余宿主DNA含量检测,用反向间接血凝实验测定牛血清蛋白残余量.结果表明建立的方法可有效应用于腺病毒样品检测,并且我们制备的纯化腺病毒样品均符合要求.结论:基本建立了腺病毒CNHK200-hEndostatin的质量控制方法,改良的应用HPLC对腺病毒颗粒数进行定量检测的方法准确迅速,优于传统方法.应用建立的方法对纯化的腺病毒样品进行检测,基本符合临床应用要求.
목적:건립기인-병독치료계통CNHK200-hEndostatin적질량공제방법.방법:분별건립선병독단백감정、선병독기인조감정、인내피억소(hEndostatin)기인감정、인내피억소표체량검측、선병독과립수측정、선병독적도화비적도측정、순도측정、야생형선병독(AdWT)검측、잔여숙주DNA함량검측화우혈청단백잔여량검측등선병독질량공제항목적방법,병대순화적선병독양품진행초보검측.결과:건립용SDS-PAGE방법대선병독진행단백감정,용한제성내절매도보분석적방법대선병독진행기인조감정,용PCR방법감정인내피억소기인,용ELISA방법검측인내피억소표체량,용D260법화HPLC방법진행선병독과립수측정,용D260/D280방법화HPLC방법진행순도검측,용PCR방법진행야생형선병독검측,용잡교방법진행잔여숙주DNA함량검측,용반향간접혈응실험측정우혈청단백잔여량.결과표명건립적방법가유효응용우선병독양품검측,병차아문제비적순화선병독양품균부합요구.결론:기본건립료선병독CNHK200-hEndostatin적질량공제방법,개량적응용HPLC대선병독과립수진행정량검측적방법준학신속,우우전통방법.응용건립적방법대순화적선병독양품진행검측,기본부합림상응용요구.