西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2007年
6期
624-626
,共3页
崔媛媛%胡海涛%董炜疆%王兰%郑慧媛%赵璇%石明娟%吴志新
崔媛媛%鬍海濤%董煒疆%王蘭%鄭慧媛%趙璇%石明娟%吳誌新
최원원%호해도%동위강%왕란%정혜원%조선%석명연%오지신
阿尔茨海默病%β-分泌酶底物肽%反转录病毒载体%包装细胞株%转染
阿爾茨海默病%β-分泌酶底物肽%反轉錄病毒載體%包裝細胞株%轉染
아이자해묵병%β-분비매저물태%반전록병독재체%포장세포주%전염
目的 用pLXSN反转录病毒载体构建介导β-分泌酶底物肽(BACEsp)基因表达的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体,并建立高效、稳定表达BACEsp的包装细胞株.方法 根据BACEsp基因序列设计引物,PCR合成的BAC-Esp片段和pLXSN载体用EcoRⅠ、BamH Ⅰ双酶切后连接,构建成表达BACEsp的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体.用脂质体介导转染PT67包装细胞,经抗性筛选后,挑单克隆扩大培养,用NIH3T3细胞测定病毒滴度,筛选出高效产毒细胞株.结果 经酶切、连接后构建成的质粒称为pLXSN-BACEsp,经测序证实构建成功,无任何碱基突变.经脂质体介导转染包装细胞、抗性筛选和测定病毒滴度,筛选出具有高病毒滴度的细胞集落,扩大培养后建立BAC-Esp高效表达的包装细胞株.结论 成功构建了能表达BACEsp的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体,并建立了稳定、高效地产生有活性的BACEsp产毒包装细胞株.
目的 用pLXSN反轉錄病毒載體構建介導β-分泌酶底物肽(BACEsp)基因錶達的pLXSN-BACEsp反轉錄病毒載體,併建立高效、穩定錶達BACEsp的包裝細胞株.方法 根據BACEsp基因序列設計引物,PCR閤成的BAC-Esp片段和pLXSN載體用EcoRⅠ、BamH Ⅰ雙酶切後連接,構建成錶達BACEsp的pLXSN-BACEsp反轉錄病毒載體.用脂質體介導轉染PT67包裝細胞,經抗性篩選後,挑單剋隆擴大培養,用NIH3T3細胞測定病毒滴度,篩選齣高效產毒細胞株.結果 經酶切、連接後構建成的質粒稱為pLXSN-BACEsp,經測序證實構建成功,無任何堿基突變.經脂質體介導轉染包裝細胞、抗性篩選和測定病毒滴度,篩選齣具有高病毒滴度的細胞集落,擴大培養後建立BAC-Esp高效錶達的包裝細胞株.結論 成功構建瞭能錶達BACEsp的pLXSN-BACEsp反轉錄病毒載體,併建立瞭穩定、高效地產生有活性的BACEsp產毒包裝細胞株.
목적 용pLXSN반전록병독재체구건개도β-분비매저물태(BACEsp)기인표체적pLXSN-BACEsp반전록병독재체,병건립고효、은정표체BACEsp적포장세포주.방법 근거BACEsp기인서렬설계인물,PCR합성적BAC-Esp편단화pLXSN재체용EcoRⅠ、BamH Ⅰ쌍매절후련접,구건성표체BACEsp적pLXSN-BACEsp반전록병독재체.용지질체개도전염PT67포장세포,경항성사선후,도단극륭확대배양,용NIH3T3세포측정병독적도,사선출고효산독세포주.결과 경매절、련접후구건성적질립칭위pLXSN-BACEsp,경측서증실구건성공,무임하감기돌변.경지질체개도전염포장세포、항성사선화측정병독적도,사선출구유고병독적도적세포집락,확대배양후건립BAC-Esp고효표체적포장세포주.결론 성공구건료능표체BACEsp적pLXSN-BACEsp반전록병독재체,병건립료은정、고효지산생유활성적BACEsp산독포장세포주.
