CAJ | 학술논문

[目的]克隆带有His标签的人神经生长因子β基因(human nerve growth factor beta,hNGF-β),并构建hNGF-β与EGFP基因复制缺陷型腺病毒载体,为hNGF蛋白的表达、纯化及对其进行神经损伤的应用研究奠定基础.[方法]用Trizol试剂提取人胎肝总RNA,应用RT-PCR方法以自行设计的带有His标签的引物来扩增NCF-β基因;将所扩增的NGF-β基因经酶切、纯化,与IRES-EGFP片段共同插入到Pshuttle-cmv载体中,测序后,利用基因同源重组技术构建hNGF基因的复制缺陷型腺病毒载体AdNGF-β,经鉴定,转染HEK293细胞,观察EGFP表达并检测重组腺病毒的病毒滴度.[结果]克隆的hNGF基因序列与GenBank中的hNGF基因序列完全一致并在3'端携带上His标签;重组腺病毒载体AdNGF-β经Pac Ⅰ酶切得到大于23.0和4.5或2.9 kb大小的2个片段,表明同源重组成功.2种重组腺病毒经脂质体介导转染293细胞后,均可观察到绿色荧光蛋白.收获病毒并测定感染滴度分别为1.00×109和0.99×109pfu/ml.[结论]克隆了带有His标签的hNGF-β基因,并成功构建了重组腺病毒载体,为hNGF蛋白的表达、纯化及对其进行神经损伤研究奠定基础.
[목적]극륭대유His표첨적인신경생장인자β기인(human nerve growth factor beta,hNGF-β),병구건hNGF-β여EGFP기인복제결함형선병독재체,위hNGF단백적표체、순화급대기진행신경손상적응용연구전정기출.[방법]용Trizol시제제취인태간총RNA,응용RT-PCR방법이자행설계적대유His표첨적인물래확증NCF-β기인;장소확증적NGF-β기인경매절、순화,여IRES-EGFP편단공동삽입도Pshuttle-cmv재체중,측서후,이용기인동원중조기술구건hNGF기인적복제결함형선병독재체AdNGF-β,경감정,전염HEK293세포,관찰EGFP표체병검측중조선병독적병독적도.[결과]극륭적hNGF기인서렬여GenBank중적hNGF기인서렬완전일치병재3'단휴대상His표첨;중조선병독재체AdNGF-β경Pac Ⅰ매절득도대우23.0화4.5혹2.9 kb대소적2개편단,표명동원중조성공.2충중조선병독경지질체개도전염293세포후,균가관찰도록색형광단백.수획병독병측정감염적도분별위1.00×109화0.99×109pfu/ml.[결론]극륭료대유His표첨적hNGF-β기인,병성공구건료중조선병독재체,위hNGF단백적표체、순화급대기진행신경손상연구전정기출.