CAJ | 학술논문

[目的]建立间接免疫荧光(IFA)检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒(DSHDV)的方法,为DSHDV感染的实验室诊断、DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位和动态研究提供有效的检测手段.[方法]用差速离心纯化DSHDV,将纯化DSHDV免疫家兔制备兔抗DSHDV高免血清,并以DEAE-SephadexA-50柱层析纯化出兔抗DSHDV IgG,建立IFA检测石蜡切片中DSHDV的方法;利用建立的IFA对28日龄鸭人工感染DSHDV死亡鸭不同组织器官以及临床样品进行检测.应用PAGE电泳分析DSHDV基因组特性.[结果]IFA最佳条件为:切片在0.01 mol·L-1 柠檬酸(pH 6.0)缓冲液微波修复20 min后,以10%马血清37℃下封闭30 min,然后加入1:50的一抗4℃孵育过夜,最后加入1:100 FITC标记的含0.01%伊文斯蓝的二抗37℃孵育30 min.IFA检测DSHDV感染死亡鸭肝脏石蜡切片为阳性,而检测鸭瘟、禽流感病毒(H5N1)、鸭病毒性肝炎、鸭疫里默氏杆菌感染死亡鸭肝脏石蜡切片为阴性.IFA检测28日龄人工感染DSHDV死亡鸭的不同组织器官,心、肝、脾、胰、肺、肾、法氏囊、食管、气管、胸肌、胸腺、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠为阳性;哈德氏腺、脑、皮肤、腺胃为阴性.阳性组织中病毒抗原主要分布在细胞浆.经甲醛固定保持1～6年的临床死亡鸭的病毒分离阳性肝脏,IFA检测结果也呈阳性.DSHDV具有呼肠孤病毒特征,有10条分节段核酸,呈"334"分布.[结论]建立的检测石蜡组织切片中DSHDV抗原的IFA具有直观、特异性强的优点,应用于DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位具有良好效果,可用于DSHDV感染的实验室诊断、病原在鸭组织细胞中分布研究.DSHDV抗原存在感染细胞浆,肠道、肾脏、法氏囊和胸腺是DSHDV侵害的主要靶器官.
[목적]건립간접면역형광(IFA)검측석사절편중압종두출혈증병독(DSHDV)적방법,위DSHDV감염적실험실진단、DSHDV재감염압조직세포중적아세포정위화동태연구제공유효적검측수단.[방법]용차속리심순화DSHDV,장순화DSHDV면역가토제비토항DSHDV고면혈청,병이DEAE-SephadexA-50주층석순화출토항DSHDV IgG,건립IFA검측석사절편중DSHDV적방법;이용건립적IFA대28일령압인공감염DSHDV사망압불동조직기관이급림상양품진행검측.응용PAGE전영분석DSHDV기인조특성.[결과]IFA최가조건위:절편재0.01 mol·L-1 저몽산(pH 6.0)완충액미파수복20 min후,이10%마혈청37℃하봉폐30 min,연후가입1:50적일항4℃부육과야,최후가입1:100 FITC표기적함0.01%이문사람적이항37℃부육30 min.IFA검측DSHDV감염사망압간장석사절편위양성,이검측압온、금류감병독(H5N1)、압병독성간염、압역리묵씨간균감염사망압간장석사절편위음성.IFA검측28일령인공감염DSHDV사망압적불동조직기관,심、간、비、이、폐、신、법씨낭、식관、기관、흉기、흉선、십이지장、공장、회장、맹장화직장위양성;합덕씨선、뇌、피부、선위위음성.양성조직중병독항원주요분포재세포장.경갑철고정보지1～6년적림상사망압적병독분리양성간장,IFA검측결과야정양성.DSHDV구유호장고병독특정,유10조분절단핵산,정"334"분포.[결론]건립적검측석사조직절편중DSHDV항원적IFA구유직관、특이성강적우점,응용우DSHDV재감염압조직세포중적아세포정위구유량호효과,가용우DSHDV감염적실험실진단、병원재압조직세포중분포연구.DSHDV항원존재감염세포장,장도、신장、법씨낭화흉선시DSHDV침해적주요파기관.