CAJ | 학술논문

研究转运膜蛋白21(TMP21)在小鼠成纤维细胞中超表达状态下,对γ分泌酶活性的影响.利用TMP21 cDNA转染敲除淀粉样前体蛋白表达基因的小鼠胚胎成纤维细胞系(MEF(KO)),以梯度浓度G418筛选TMP21表达量最高的细胞.处理超表达组(T)和对照组(C)细胞,并收集纯化含γ分泌酶复合物的样本.用Western blotting检测TMP21蛋白表达量,选用饱和浓度的γ分泌酶底物C99,运用ELISA检测Aβ-peptide40和Aβ-peptide42的生成总量.结果表明,样本T1、T2及IPT2所含TMP21的蛋白表达量较相应对照组样本C1、C2和IPC2分别上升11.5%(P=0.08),28.1%(P＜0.01),69.1%(P＜0.001),提示经TMP21 cDNA转染后MEF(KO)细胞中TMP21蛋白表达明显提高.同时,对照样本C1、C2及IPC2,样本T1、T2及IPT2中所含γ分泌酶活性分别降低33.4%(P=0.01),71.9%(P＜0.001),96.5%(P＜0.001).转染组样本中,样本IPT2所含γ分泌酶活性最低,提示经处理γ分泌酶得到明显纯化分离,与Western blotting所得结果一致.因此,高表达状态下的TMP21蛋白,对MEF(KO)细胞中γ分泌酶的活性具有明显的降低作用,表明TMP21为γ分泌酶的负调控因子之一.
연구전운막단백21(TMP21)재소서성섬유세포중초표체상태하,대γ분비매활성적영향.이용TMP21 cDNA전염고제정분양전체단백표체기인적소서배태성섬유세포계(MEF(KO)),이제도농도G418사선TMP21표체량최고적세포.처리초표체조(T)화대조조(C)세포,병수집순화함γ분비매복합물적양본.용Western blotting검측TMP21단백표체량,선용포화농도적γ분비매저물C99,운용ELISA검측Aβ-peptide40화Aβ-peptide42적생성총량.결과표명,양본T1、T2급IPT2소함TMP21적단백표체량교상응대조조양본C1、C2화IPC2분별상승11.5%(P=0.08),28.1%(P＜0.01),69.1%(P＜0.001),제시경TMP21 cDNA전염후MEF(KO)세포중TMP21단백표체명현제고.동시,대조양본C1、C2급IPC2,양본T1、T2급IPT2중소함γ분비매활성분별강저33.4%(P=0.01),71.9%(P＜0.001),96.5%(P＜0.001).전염조양본중,양본IPT2소함γ분비매활성최저,제시경처리γ분비매득도명현순화분리,여Western blotting소득결과일치.인차,고표체상태하적TMP21단백,대MEF(KO)세포중γ분비매적활성구유명현적강저작용,표명TMP21위γ분비매적부조공인자지일.