CAJ | 학술논문

背景:碱性成纤维细胞生长因子对来源于中胚层和神经外胚层的细胞具有明显的促进增殖作用,对骨髓间充质干细胞具有间接的成骨作用.目的:观察碱性成纤维细胞生长因子基因转染对骨髓源性成骨细胞生物学特性和血管生成的影响,与骨髓间充质干细胞作对比.设计、时间及地点:对比分析基因转染效果实验,于2007-11-27/2008-12-01在南方医科大学珠江医院中心实验室和动物实验中心完成.材料:2月龄新西兰大白兔用于骨髓间充质干细胞的分离培养及成骨细胞诱导.5周龄Wistar大鼠用于移植实验.牛pcDNA3-bFGF真核表达质粒由中山大学中山医学院免疫教研室徐霖博士惠赠.方法:分离兔骨髓间充质干细胞和骨髓源性成骨细胞,采用脂质体介导将牛pcDNA3-bFGF真核表达质粒分别转染体外培养的兔骨髓间充质干细胞和诱导的骨髓源性成骨细胞,G418筛选.稳定转染碱性成纤维细胞生长因子的骨髓源性成骨细胞与磷酸钙胶原材料复合培养,植于Wistar大鼠后腿肌袋内,正常饲养2,4周后取出植入的复合材料,观察血管新生情况.主要观察指标:碱性成纤维细胞生长因子转染前后骨髓间充质干细胞和骨髓源性成骨细胞生物学特性参数的比较以及骨髓源性成骨细胞转染碱性成纤维细胞生长因子前后新生血管数目的比较.结果:利用RT-PCR、免疫细胞化学染色分析转染细胞的碱性成纤维细胞生长因子表达情况.从形态、增殖特性和细胞周期、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原等方面分析稳定表达碱性成纤维细胞生长因子的骨髓间充质干细胞和骨髓源性成骨细胞生物学特性.重组牛pcDNA3-bFGF真核表达质粒成功转染目的细胞,经G418筛选稳定表达.转染的细胞有大量目的基因mRNA转录和目的蛋白表达.转染碱性成纤维细胞生长因子基因的骨髓间充质干细胞和骨髓源性成骨细胞生长均加快,细胞周期中增殖期细胞比例明显增加,细胞形态无明显变化.转染与未转染的骨髓源性成骨细胞比较,碱性磷酸酶的分泌量无明显变化(P＞0.05),转染后骨髓间充质干细胞的碱性磷酸酶分泌量小于骨髓源性成骨细胞(P＜0.01).骨髓源性成骨细胞转染与未转染碱性成纤维细胞生长因子基因组均有Ⅰ型胶原mRNA表达,但是,转染和未转染的骨髓间充质干细胞中均无Ⅰ型胶原基因mRNA转录.转染有外源性碱性成纤维细胞生长因子基因的复合材料部分被增生纤维结缔组织包绕,内有新生血管生成,随着时间的延长而增多.结论:稳定表达碱性成纤维细胞生长因子的骨髓间充质干细胞和骨髓源性成骨细胞增殖较快,但作为组织工程骨的种子细胞,骨髓源性成骨细胞较骨髓间充质干细胞更理想.外源碱性成纤维细胞生长因子基因转染后稳定表达,对新生血管的形成具有促进作用,可以作为组织工程化人工骨种子细胞转染的目的基因. 揹景:堿性成纖維細胞生長因子對來源于中胚層和神經外胚層的細胞具有明顯的促進增殖作用,對骨髓間充質榦細胞具有間接的成骨作用.目的:觀察堿性成纖維細胞生長因子基因轉染對骨髓源性成骨細胞生物學特性和血管生成的影響,與骨髓間充質榦細胞作對比.設計、時間及地點:對比分析基因轉染效果實驗,于2007-11-27/2008-12-01在南方醫科大學珠江醫院中心實驗室和動物實驗中心完成.材料:2月齡新西蘭大白兔用于骨髓間充質榦細胞的分離培養及成骨細胞誘導.5週齡Wistar大鼠用于移植實驗.牛pcDNA3-bFGF真覈錶達質粒由中山大學中山醫學院免疫教研室徐霖博士惠贈.方法:分離兔骨髓間充質榦細胞和骨髓源性成骨細胞,採用脂質體介導將牛pcDNA3-bFGF真覈錶達質粒分彆轉染體外培養的兔骨髓間充質榦細胞和誘導的骨髓源性成骨細胞,G418篩選.穩定轉染堿性成纖維細胞生長因子的骨髓源性成骨細胞與燐痠鈣膠原材料複閤培養,植于Wistar大鼠後腿肌袋內,正常飼養2,4週後取齣植入的複閤材料,觀察血管新生情況.主要觀察指標:堿性成纖維細胞生長因子轉染前後骨髓間充質榦細胞和骨髓源性成骨細胞生物學特性參數的比較以及骨髓源性成骨細胞轉染堿性成纖維細胞生長因子前後新生血管數目的比較.結果:利用RT-PCR、免疫細胞化學染色分析轉染細胞的堿性成纖維細胞生長因子錶達情況.從形態、增殖特性和細胞週期、堿性燐痠酶、Ⅰ型膠原等方麵分析穩定錶達堿性成纖維細胞生長因子的骨髓間充質榦細胞和骨髓源性成骨細胞生物學特性.重組牛pcDNA3-bFGF真覈錶達質粒成功轉染目的細胞,經G418篩選穩定錶達.轉染的細胞有大量目的基因mRNA轉錄和目的蛋白錶達.轉染堿性成纖維細胞生長因子基因的骨髓間充質榦細胞和骨髓源性成骨細胞生長均加快,細胞週期中增殖期細胞比例明顯增加,細胞形態無明顯變化.轉染與未轉染的骨髓源性成骨細胞比較,堿性燐痠酶的分泌量無明顯變化(P＞0.05),轉染後骨髓間充質榦細胞的堿性燐痠酶分泌量小于骨髓源性成骨細胞(P＜0.01).骨髓源性成骨細胞轉染與未轉染堿性成纖維細胞生長因子基因組均有Ⅰ型膠原mRNA錶達,但是,轉染和未轉染的骨髓間充質榦細胞中均無Ⅰ型膠原基因mRNA轉錄.轉染有外源性堿性成纖維細胞生長因子基因的複閤材料部分被增生纖維結締組織包繞,內有新生血管生成,隨著時間的延長而增多.結論:穩定錶達堿性成纖維細胞生長因子的骨髓間充質榦細胞和骨髓源性成骨細胞增殖較快,但作為組織工程骨的種子細胞,骨髓源性成骨細胞較骨髓間充質榦細胞更理想.外源堿性成纖維細胞生長因子基因轉染後穩定錶達,對新生血管的形成具有促進作用,可以作為組織工程化人工骨種子細胞轉染的目的基因.
배경:감성성섬유세포생장인자대래원우중배층화신경외배층적세포구유명현적촉진증식작용,대골수간충질간세포구유간접적성골작용.목적:관찰감성성섬유세포생장인자기인전염대골수원성성골세포생물학특성화혈관생성적영향,여골수간충질간세포작대비.설계、시간급지점:대비분석기인전염효과실험,우2007-11-27/2008-12-01재남방의과대학주강의원중심실험실화동물실험중심완성.재료:2월령신서란대백토용우골수간충질간세포적분리배양급성골세포유도.5주령Wistar대서용우이식실험.우pcDNA3-bFGF진핵표체질립유중산대학중산의학원면역교연실서림박사혜증.방법:분리토골수간충질간세포화골수원성성골세포,채용지질체개도장우pcDNA3-bFGF진핵표체질립분별전염체외배양적토골수간충질간세포화유도적골수원성성골세포,G418사선.은정전염감성성섬유세포생장인자적골수원성성골세포여린산개효원재료복합배양,식우Wistar대서후퇴기대내,정상사양2,4주후취출식입적복합재료,관찰혈관신생정황.주요관찰지표:감성성섬유세포생장인자전염전후골수간충질간세포화골수원성성골세포생물학특성삼수적비교이급골수원성성골세포전염감성성섬유세포생장인자전후신생혈관수목적비교.결과:이용RT-PCR、면역세포화학염색분석전염세포적감성성섬유세포생장인자표체정황.종형태、증식특성화세포주기、감성린산매、Ⅰ형효원등방면분석은정표체감성성섬유세포생장인자적골수간충질간세포화골수원성성골세포생물학특성.중조우pcDNA3-bFGF진핵표체질립성공전염목적세포,경G418사선은정표체.전염적세포유대량목적기인mRNA전록화목적단백표체.전염감성성섬유세포생장인자기인적골수간충질간세포화골수원성성골세포생장균가쾌,세포주기중증식기세포비례명현증가,세포형태무명현변화.전염여미전염적골수원성성골세포비교,감성린산매적분비량무명현변화(P＞0.05),전염후골수간충질간세포적감성린산매분비량소우골수원성성골세포(P＜0.01).골수원성성골세포전염여미전염감성성섬유세포생장인자기인조균유Ⅰ형효원mRNA표체,단시,전염화미전염적골수간충질간세포중균무Ⅰ형효원기인mRNA전록.전염유외원성감성성섬유세포생장인자기인적복합재료부분피증생섬유결체조직포요,내유신생혈관생성,수착시간적연장이증다.결론:은정표체감성성섬유세포생장인자적골수간충질간세포화골수원성성골세포증식교쾌,단작위조직공정골적충자세포,골수원성성골세포교골수간충질간세포경이상.외원감성성섬유세포생장인자기인전염후은정표체,대신생혈관적형성구유촉진작용,가이작위조직공정화인공골충자세포전염적목적기인.