新疆农业科学
新疆農業科學
신강농업과학
XINJIANG AGRICULTURAL SCIENCES
2011年
9期
1611-1616
,共6页
王柏柯%帕提古丽%杨生保%杨涛%张贵仁%余庆辉
王柏柯%帕提古麗%楊生保%楊濤%張貴仁%餘慶輝
왕백가%파제고려%양생보%양도%장귀인%여경휘
番茄%CAPS%体系优化
番茄%CAPS%體繫優化
번가%CAPS%체계우화
[目的]以加工番茄M82、IL7 1-5为材料,研究加工番茄CAPS分析中PCR反应体系的主要成分对CAPS扩增结果的影响.[方法]以公开发表并检验稳定的CAPS标记c2_at5g20180为引物,PCR反应采用25 μL反应体积,含模板DNA 100 ng,2.5 UTaq DNA聚合酶,1.5 mmol/L MgCl2,0.2 mmool/L dNTPs,0.15μmmol/L引物.在保持其它因素一致的条件下,通过5个梯度,变化单一因子,筛选最优参数.反应程序为:94℃预变性3 min；94℃变性40 s,55℃退火40 s,72℃延伸90 s,共37个循环,最后72℃延伸10 min,4℃保存产物.[结果]通过体系优化,成功扩增出清晰稳定的PCR产物.[结论]在总体积为25 μL的PCR反应中,含50 ng模板DNA,0.75 UTaq DNA聚合酶,Mg2+终浓度为1.5 mmol/L,dNTP浓度为0.16 mmol/L,引物浓度为0.2 μmol/L时效果最好.
[目的]以加工番茄M82、IL7 1-5為材料,研究加工番茄CAPS分析中PCR反應體繫的主要成分對CAPS擴增結果的影響.[方法]以公開髮錶併檢驗穩定的CAPS標記c2_at5g20180為引物,PCR反應採用25 μL反應體積,含模闆DNA 100 ng,2.5 UTaq DNA聚閤酶,1.5 mmol/L MgCl2,0.2 mmool/L dNTPs,0.15μmmol/L引物.在保持其它因素一緻的條件下,通過5箇梯度,變化單一因子,篩選最優參數.反應程序為:94℃預變性3 min；94℃變性40 s,55℃退火40 s,72℃延伸90 s,共37箇循環,最後72℃延伸10 min,4℃保存產物.[結果]通過體繫優化,成功擴增齣清晰穩定的PCR產物.[結論]在總體積為25 μL的PCR反應中,含50 ng模闆DNA,0.75 UTaq DNA聚閤酶,Mg2+終濃度為1.5 mmol/L,dNTP濃度為0.16 mmol/L,引物濃度為0.2 μmol/L時效果最好.
[목적]이가공번가M82、IL7 1-5위재료,연구가공번가CAPS분석중PCR반응체계적주요성분대CAPS확증결과적영향.[방법]이공개발표병검험은정적CAPS표기c2_at5g20180위인물,PCR반응채용25 μL반응체적,함모판DNA 100 ng,2.5 UTaq DNA취합매,1.5 mmol/L MgCl2,0.2 mmool/L dNTPs,0.15μmmol/L인물.재보지기타인소일치적조건하,통과5개제도,변화단일인자,사선최우삼수.반응정서위:94℃예변성3 min；94℃변성40 s,55℃퇴화40 s,72℃연신90 s,공37개순배,최후72℃연신10 min,4℃보존산물.[결과]통과체계우화,성공확증출청석은정적PCR산물.[결론]재총체적위25 μL적PCR반응중,함50 ng모판DNA,0.75 UTaq DNA취합매,Mg2+종농도위1.5 mmol/L,dNTP농도위0.16 mmol/L,인물농도위0.2 μmol/L시효과최호.
