中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
4期
21-24
,共4页
王强%徐义兵%郭春和%黄毓茂
王彊%徐義兵%郭春和%黃毓茂
왕강%서의병%곽춘화%황육무
黑曲霉%糖化酶%毕赤酵母%分泌表达%活性鉴定
黑麯黴%糖化酶%畢赤酵母%分泌錶達%活性鑒定
흑곡매%당화매%필적효모%분비표체%활성감정
为高效表达黑曲霉糖化酶基因,根据GenBank中糖化酶的氨基酸序列(登录号:AY652617),选用毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子偏嗜性,全基因合成新的cDNA序列.改造后的基因克隆到pGAPZaA质粒中,获得重组分泌型酵母表达质粒pGAPZaA-EC,经限制性内切酶Bln Ⅰ酶切线性化后,电击转化人毕赤酵母细胞X33内.经高浓度博莱霉素抗性筛选,得到高拷贝转化子,PCR检测结果显示,糖化酶基因与毕赤酵母染色体稳定结合.糖化酶蛋白获得分泌表达,SDSPAGE分析其分子质量约为80 ku,其表达量约为180 mg/L.表达产物经Starch-PAGE活性染色,显示其具有酶学活性.
為高效錶達黑麯黴糖化酶基因,根據GenBank中糖化酶的氨基痠序列(登錄號:AY652617),選用畢赤酵母(Pichia pastoris)密碼子偏嗜性,全基因閤成新的cDNA序列.改造後的基因剋隆到pGAPZaA質粒中,穫得重組分泌型酵母錶達質粒pGAPZaA-EC,經限製性內切酶Bln Ⅰ酶切線性化後,電擊轉化人畢赤酵母細胞X33內.經高濃度博萊黴素抗性篩選,得到高拷貝轉化子,PCR檢測結果顯示,糖化酶基因與畢赤酵母染色體穩定結閤.糖化酶蛋白穫得分泌錶達,SDSPAGE分析其分子質量約為80 ku,其錶達量約為180 mg/L.錶達產物經Starch-PAGE活性染色,顯示其具有酶學活性.
위고효표체흑곡매당화매기인,근거GenBank중당화매적안기산서렬(등록호:AY652617),선용필적효모(Pichia pastoris)밀마자편기성,전기인합성신적cDNA서렬.개조후적기인극륭도pGAPZaA질립중,획득중조분비형효모표체질립pGAPZaA-EC,경한제성내절매Bln Ⅰ매절선성화후,전격전화인필적효모세포X33내.경고농도박래매소항성사선,득도고고패전화자,PCR검측결과현시,당화매기인여필적효모염색체은정결합.당화매단백획득분비표체,SDSPAGE분석기분자질량약위80 ku,기표체량약위180 mg/L.표체산물경Starch-PAGE활성염색,현시기구유매학활성.
