中华检验医学杂志
中華檢驗醫學雜誌
중화검험의학잡지
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2007年
11期
1227-1231
,共5页
彭辉%冯文莉%王小中%曾建明%肖青%潘健%曹唯希%罗云萍%黄宗干
彭輝%馮文莉%王小中%曾建明%肖青%潘健%曹唯希%囉雲萍%黃宗榦
팽휘%풍문리%왕소중%증건명%초청%반건%조유희%라운평%황종간
聚合酶链反应%自身淬灭探针%白血病,粒细胞,慢性期%bcr/abl融合基因
聚閤酶鏈反應%自身淬滅探針%白血病,粒細胞,慢性期%bcr/abl融閤基因
취합매련반응%자신쉬멸탐침%백혈병,립세포,만성기%bcr/abl융합기인
目的 利用自身淬灭探针技术建立一种能检测慢性粒细胞白血病(CML)bcr/abl融合基因mRNA的实时荧光定量PCR方法,为CML的诊断、疗效观察以及微量残留白血病(MRD)的监测提供有效手段.方法 用逆转录PCR方法(RT-PCR)扩增K562细胞的bcr/abl融合基因,A-T克隆法构建定量标准模板;设计自身淬灭荧光引物(探针),建立自身淬灭荧光定量逆转录PCR方法(FQRT-PCR),并对该方法的线性检测范围、灵敏度、重复性、稳定性进行检测;然后检测临床白血病患者骨髓标本bcr/abl mRNA.结果 建立的FQ-RT-PCR方法可检测10 copies/μl的bcr/abl重组质粒,并能从105个正常细胞中检出1个白血病细胞,该方法的批内、批间变异系数(CV)分别为2.1%、6.1%,线性检测范围为102～109 copies/μl.25例CML患者bcr/abl融合基因mRNA表达量中位数为4.50×104[(0.45～89.00)×104]copies/μg RNA,其中11例慢性期初诊患者bcr/abl mRNA表达量中位数为5.45×104[(2.95～19.30)×104]copies/μg RNA,6例急变期患者bcr/abl mRNA表达量中位数为13.00×104[(4.10～89.00)×104]copies/μg RNA,8例慢性期治疗后复查患者bcr/ablmRNA表达量中位数为2.35×104[(0.45～5.12)×104]copies/μg RNA,CML急变期患者bcr/abl融合基因表达水平与慢性期患者之间差异有统计学意义(q=3.41,P＜0.05).PCR产物经电泳分析,其中21例CML患者为b3a2型,4例CML患者为b2a2型;3例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中,1例有bcr/abl mRNA表达,为b2a2型.结论 所建立的基于自身淬灭探针技术的实时荧光定量PCR检测方法灵敏、特异、重复性好,结果用拷贝数表示,准确可靠,利于标准统一.可广泛用于CML的诊断、疗效观察以及MRD的监测.
目的 利用自身淬滅探針技術建立一種能檢測慢性粒細胞白血病(CML)bcr/abl融閤基因mRNA的實時熒光定量PCR方法,為CML的診斷、療效觀察以及微量殘留白血病(MRD)的鑑測提供有效手段.方法 用逆轉錄PCR方法(RT-PCR)擴增K562細胞的bcr/abl融閤基因,A-T剋隆法構建定量標準模闆;設計自身淬滅熒光引物(探針),建立自身淬滅熒光定量逆轉錄PCR方法(FQRT-PCR),併對該方法的線性檢測範圍、靈敏度、重複性、穩定性進行檢測;然後檢測臨床白血病患者骨髓標本bcr/abl mRNA.結果 建立的FQ-RT-PCR方法可檢測10 copies/μl的bcr/abl重組質粒,併能從105箇正常細胞中檢齣1箇白血病細胞,該方法的批內、批間變異繫數(CV)分彆為2.1%、6.1%,線性檢測範圍為102～109 copies/μl.25例CML患者bcr/abl融閤基因mRNA錶達量中位數為4.50×104[(0.45～89.00)×104]copies/μg RNA,其中11例慢性期初診患者bcr/abl mRNA錶達量中位數為5.45×104[(2.95～19.30)×104]copies/μg RNA,6例急變期患者bcr/abl mRNA錶達量中位數為13.00×104[(4.10～89.00)×104]copies/μg RNA,8例慢性期治療後複查患者bcr/ablmRNA錶達量中位數為2.35×104[(0.45～5.12)×104]copies/μg RNA,CML急變期患者bcr/abl融閤基因錶達水平與慢性期患者之間差異有統計學意義(q=3.41,P＜0.05).PCR產物經電泳分析,其中21例CML患者為b3a2型,4例CML患者為b2a2型;3例急性淋巴細胞白血病(ALL)患者中,1例有bcr/abl mRNA錶達,為b2a2型.結論 所建立的基于自身淬滅探針技術的實時熒光定量PCR檢測方法靈敏、特異、重複性好,結果用拷貝數錶示,準確可靠,利于標準統一.可廣汎用于CML的診斷、療效觀察以及MRD的鑑測.
목적 이용자신쉬멸탐침기술건립일충능검측만성립세포백혈병(CML)bcr/abl융합기인mRNA적실시형광정량PCR방법,위CML적진단、료효관찰이급미량잔류백혈병(MRD)적감측제공유효수단.방법 용역전록PCR방법(RT-PCR)확증K562세포적bcr/abl융합기인,A-T극륭법구건정량표준모판;설계자신쉬멸형광인물(탐침),건립자신쉬멸형광정량역전록PCR방법(FQRT-PCR),병대해방법적선성검측범위、령민도、중복성、은정성진행검측;연후검측림상백혈병환자골수표본bcr/abl mRNA.결과 건립적FQ-RT-PCR방법가검측10 copies/μl적bcr/abl중조질립,병능종105개정상세포중검출1개백혈병세포,해방법적비내、비간변이계수(CV)분별위2.1%、6.1%,선성검측범위위102～109 copies/μl.25례CML환자bcr/abl융합기인mRNA표체량중위수위4.50×104[(0.45～89.00)×104]copies/μg RNA,기중11례만성기초진환자bcr/abl mRNA표체량중위수위5.45×104[(2.95～19.30)×104]copies/μg RNA,6례급변기환자bcr/abl mRNA표체량중위수위13.00×104[(4.10～89.00)×104]copies/μg RNA,8례만성기치료후복사환자bcr/ablmRNA표체량중위수위2.35×104[(0.45～5.12)×104]copies/μg RNA,CML급변기환자bcr/abl융합기인표체수평여만성기환자지간차이유통계학의의(q=3.41,P＜0.05).PCR산물경전영분석,기중21례CML환자위b3a2형,4례CML환자위b2a2형;3례급성림파세포백혈병(ALL)환자중,1례유bcr/abl mRNA표체,위b2a2형.결론 소건립적기우자신쉬멸탐침기술적실시형광정량PCR검측방법령민、특이、중복성호,결과용고패수표시,준학가고,리우표준통일.가엄범용우CML적진단、료효관찰이급MRD적감측.
