CAJ | 학술논문

目的寻找新的支持HCV亚基因复制子复制的支持细胞,为研究HCV复制机制、HCV与宿主间的关系,及建立HCV缺陷病毒培养体系提供材料储备.方法质粒pNNeo3-5B含HCV-N亚基因复制子cDNA,该复制子RNA能在Huh7细胞中有效复制.缺失其中的BsaB Ⅰ-Hpa Ⅰ片段(含NS5B的GDD基序),生成缺陷型复制子质粒pNNeo3-5B(△).将以上两个质粒线性化后体外转录出复制子RNA:rNNeo3-5B和rNNeo3-5B(△).将rNNeo3-5B电转染Huh7、SMMC7721、HepG2、BEL7402、Lo2、CBRH7919、BHIK21、Vero E6、293和293T等细胞,以G418筛选3周,观察克隆形成情况,并检测克隆中HCV特异性RNA和蛋白.结果在CBRH7919和BHK21获得G418抗性克隆,转染rNNeo3-5B(△)的细胞和未转染复制子的细胞则全部死亡.RT-PCR检测证实各克隆都含有HCV 5'NTR和新霉素磷酸转移酶基因,间接免疫荧光和Western blot检测证实有大量表达的HCV NS3和NS5A蛋白,未转染复制子的细胞全为阴性.结论本研究证实CBRH7919和BHK21能支持HCV复制子的自主复制,可作为建立HCV病毒培养体系的备选材料.
목적심조신적지지HCV아기인복제자복제적지지세포,위연구HCV복제궤제、HCV여숙주간적관계,급건립HCV결함병독배양체계제공재료저비.방법질립pNNeo3-5B함HCV-N아기인복제자cDNA,해복제자RNA능재Huh7세포중유효복제.결실기중적BsaB Ⅰ-Hpa Ⅰ편단(함NS5B적GDD기서),생성결함형복제자질립pNNeo3-5B(△).장이상량개질립선성화후체외전록출복제자RNA:rNNeo3-5B화rNNeo3-5B(△).장rNNeo3-5B전전염Huh7、SMMC7721、HepG2、BEL7402、Lo2、CBRH7919、BHIK21、Vero E6、293화293T등세포,이G418사선3주,관찰극륭형성정황,병검측극륭중HCV특이성RNA화단백.결과재CBRH7919화BHK21획득G418항성극륭,전염rNNeo3-5B(△)적세포화미전염복제자적세포칙전부사망.RT-PCR검측증실각극륭도함유HCV 5'NTR화신매소린산전이매기인,간접면역형광화Western blot검측증실유대량표체적HCV NS3화NS5A단백,미전염복제자적세포전위음성.결론본연구증실CBRH7919화BHK21능지지HCV복제자적자주복제,가작위건립HCV병독배양체계적비선재료.