CAJ | 학술논문

目的:构建带His标记的人高迁移率族蛋白1(HMGB1)融合蛋白原核细胞表达质粒,表达并纯化人HMGB1重组蛋白,观察其对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)释放细胞因子的影响.方法:首先将目的片段HMGB1亚克隆到改造的载体pET14b上,经鉴定、测序证实序列正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His-HMGB1融合蛋白,用Ni-NTA亲和树脂纯化.将纯化得到的HMGB1蛋白经透析和过滤除菌后,刺激人脐静脉内皮细胞,24h后收集培养上清,经LiquiChip液相蛋白芯片系统检测细胞因子.结果:构建的pET14b/HMGB1表达质粒经酶切和测序验证正确;表达的目的蛋白经Western blotting验证能被His抗体识别;检查了纯化的HMGB1蛋白对HUVEC产生细胞因子的影响,发现重组的HMGB1可诱导白细胞介素8(IL-8)上调,并且呈剂量依赖性关系.结论:成功构建了His-HMGB1原核细胞表达质粒并纯化得到重组的HMGB1;在HUVEC模型上证实所得到的HMGB1蛋白具有生物学活性.本实验为进一步研究HMGB1的功能提供了重要的实验材料.
목적:구건대His표기적인고천이솔족단백1(HMGB1)융합단백원핵세포표체질립,표체병순화인HMGB1중조단백,관찰기대인제정맥내피세포(HUVEC)석방세포인자적영향.방법:수선장목적편단HMGB1아극륭도개조적재체pET14b상,경감정、측서증실서렬정학후전화대장간균BL21(DE3),이병기-β-D류대반유당감(IPTG)유도표체His-HMGB1융합단백,용Ni-NTA친화수지순화.장순화득도적HMGB1단백경투석화과려제균후,자격인제정맥내피세포,24h후수집배양상청,경LiquiChip액상단백심편계통검측세포인자.결과:구건적pET14b/HMGB1표체질립경매절화측서험증정학;표체적목적단백경Western blotting험증능피His항체식별;검사료순화적HMGB1단백대HUVEC산생세포인자적영향,발현중조적HMGB1가유도백세포개소8(IL-8)상조,병차정제량의뢰성관계.결론:성공구건료His-HMGB1원핵세포표체질립병순화득도중조적HMGB1;재HUVEC모형상증실소득도적HMGB1단백구유생물학활성.본실험위진일보연구HMGB1적공능제공료중요적실험재료.