畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2006年
6期
10-13
,共4页
简永利%蔡建平%于三科%覃宗华%林青%叶秀华%陈闻%党海斌
簡永利%蔡建平%于三科%覃宗華%林青%葉秀華%陳聞%黨海斌
간영리%채건평%우삼과%담종화%림청%협수화%진문%당해빈
柔嫩艾美耳球虫%表面抗原2%基因克隆%表达
柔嫩艾美耳毬蟲%錶麵抗原2%基因剋隆%錶達
유눈애미이구충%표면항원2%기인극륭%표체
根据生物信息学预测的基因序列设计引物,应用RT-PCR方法从柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA扩增获得了鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原2(surface antigen 2,SAG2)基因序列,将其与pGEM-T easy载体连接后转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,以带有限制酶切位点的特异性引物用PCR方法扩增不含SAG2N端信号肽序列的ORF序列后克隆至表达载体pET-32a(+),构建了重组表达质粒pET-32a(+)-SAG2,并将其转化至E.coli BL21(DE3).经IPTG诱导,获得了SAG2重组抗原在大肠杆菌的高效表达,重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,融合蛋白的分子量约为47 ku.菌体经超声处理后进行SDS-PAGE分析表明,表达蛋白以包涵体的形式存在.
根據生物信息學預測的基因序列設計引物,應用RT-PCR方法從柔嫩艾美耳毬蟲第二代裂殖子總RNA擴增穫得瞭鷄柔嫩艾美耳毬蟲錶麵抗原2(surface antigen 2,SAG2)基因序列,將其與pGEM-T easy載體連接後轉化E.coli DH5α,篩選暘性剋隆,以帶有限製酶切位點的特異性引物用PCR方法擴增不含SAG2N耑信號肽序列的ORF序列後剋隆至錶達載體pET-32a(+),構建瞭重組錶達質粒pET-32a(+)-SAG2,併將其轉化至E.coli BL21(DE3).經IPTG誘導,穫得瞭SAG2重組抗原在大腸桿菌的高效錶達,重組蛋白的錶達量約佔菌體總蛋白的35%,融閤蛋白的分子量約為47 ku.菌體經超聲處理後進行SDS-PAGE分析錶明,錶達蛋白以包涵體的形式存在.
근거생물신식학예측적기인서렬설계인물,응용RT-PCR방법종유눈애미이구충제이대렬식자총RNA확증획득료계유눈애미이구충표면항원2(surface antigen 2,SAG2)기인서렬,장기여pGEM-T easy재체련접후전화E.coli DH5α,사선양성극륭,이대유한제매절위점적특이성인물용PCR방법확증불함SAG2N단신호태서렬적ORF서렬후극륭지표체재체pET-32a(+),구건료중조표체질립pET-32a(+)-SAG2,병장기전화지E.coli BL21(DE3).경IPTG유도,획득료SAG2중조항원재대장간균적고효표체,중조단백적표체량약점균체총단백적35%,융합단백적분자량약위47 ku.균체경초성처리후진행SDS-PAGE분석표명,표체단백이포함체적형식존재.
