CAJ | 학술논문

目的:观察兔关节软骨细胞在3种不同培养条件下增殖速率的差别.方法:实验于2004-10/2006-10在上海长海医院血管外科实验室完成.取4周龄新西兰雄性兔6只,利用机械与酶消化的方法获得均一性兔关节软骨细胞,在单层培养条件下增殖至第2代;将第2代细胞在高密度条件下转入藻酸盐凝胶24孔培养介质,进行三维培养.根据实验目的,将24孔培养板分为单层培养对照组,三维培养组(培养液不含胰岛素样生长因子Ⅰ),含胰岛素样生长因子Ⅰ三维培养组(培养液含50 μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ),每日在倒置相差显微镜下观察软骨细胞的生长状态,进行细胞计数1周,绘制细胞生长曲线,比较3种不同培养条件下兔关节软骨细胞的增殖速率.结果:①单层培养细胞24 h后开始贴壁生长,细胞形态呈多角形、星形、圆形,72 h后,倒置显微镜下观察细胞增殖数目明显增多,细胞增殖呈片状;三维培养条件下的软骨细胞,刚接种至藻酸钠凝胶时,细胞形态为圆形;三维培养(含胰岛素样生长因子Ⅰ)体系中的软骨细胞从转入三维培养的第3天起,发现细胞出现分裂增殖,局部有细胞团族形成,第7天,凝胶中开始有大量的细胞团族形成.在培养过程中,三维培养软骨细胞形态始终保持圆形.②1周内,单层培养条件下的软骨细胞增殖速率要明显高于三维培养组;含胰岛素样生长因子Ⅰ三维培养组的软骨细胞增殖速率明显高于不含胰岛素样生长因子Ⅰ三维培养组.结论:单层培养方法短期内(1周)对软骨细胞的增殖作用要优于三维培养方法;胰岛素样生长因子Ⅰ对三维培养条件下关节软骨细胞具有促进增殖的作用.
목적:관찰토관절연골세포재3충불동배양조건하증식속솔적차별.방법:실험우2004-10/2006-10재상해장해의원혈관외과실험실완성.취4주령신서란웅성토6지,이용궤계여매소화적방법획득균일성토관절연골세포,재단층배양조건하증식지제2대;장제2대세포재고밀도조건하전입조산염응효24공배양개질,진행삼유배양.근거실험목적,장24공배양판분위단층배양대조조,삼유배양조(배양액불함이도소양생장인자Ⅰ),함이도소양생장인자Ⅰ삼유배양조(배양액함50 μg/L이도소양생장인자Ⅰ),매일재도치상차현미경하관찰연골세포적생장상태,진행세포계수1주,회제세포생장곡선,비교3충불동배양조건하토관절연골세포적증식속솔.결과:①단층배양세포24 h후개시첩벽생장,세포형태정다각형、성형、원형,72 h후,도치현미경하관찰세포증식수목명현증다,세포증식정편상;삼유배양조건하적연골세포,강접충지조산납응효시,세포형태위원형;삼유배양(함이도소양생장인자Ⅰ)체계중적연골세포종전입삼유배양적제3천기,발현세포출현분렬증식,국부유세포단족형성,제7천,응효중개시유대량적세포단족형성.재배양과정중,삼유배양연골세포형태시종보지원형.②1주내,단층배양조건하적연골세포증식속솔요명현고우삼유배양조;함이도소양생장인자Ⅰ삼유배양조적연골세포증식속솔명현고우불함이도소양생장인자Ⅰ삼유배양조.결론:단층배양방법단기내(1주)대연골세포적증식작용요우우삼유배양방법;이도소양생장인자Ⅰ대삼유배양조건하관절연골세포구유촉진증식적작용.