核农学报
覈農學報
핵농학보
ACTA AGRICULTURAE NUCLEATAE SINICA
2007年
5期
470-473,513
,共5页
汪结明%项艳%吴大强%孙志娟%蔡诚
汪結明%項豔%吳大彊%孫誌娟%蔡誠
왕결명%항염%오대강%손지연%채성
杨树%ISSR%正交设计%反应体系%优化
楊樹%ISSR%正交設計%反應體繫%優化
양수%ISSR%정교설계%반응체계%우화
采用正交设计的方法,对杨树ISSR-PCR反应中5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP和引物)在4个水平上进行优化试验.建立了适合杨树的既稳定又能扩出最多数量谱带的ISSR-PCR最佳反应体系,即25μl的反应体系中含有1×buffer,0.12mmol/L dNTP,0.4μmol/L引物,3.5 mmol/L Mg2+,1.5U TaqDNA聚合酶和40ng模板DNA.对杨树ISSR-PCR最佳反应体系的退火温度进行梯度试验,发现引物W95142的最适退火温度为56.1℃,且最适退火温度因引物而异.这一优化的ISSR-PCR反应体系的建立为今后利用ISSR技术进行杨树种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了技术基础.
採用正交設計的方法,對楊樹ISSR-PCR反應中5箇因素(Taq酶、Mg2+、模闆DNA、dNTP和引物)在4箇水平上進行優化試驗.建立瞭適閤楊樹的既穩定又能擴齣最多數量譜帶的ISSR-PCR最佳反應體繫,即25μl的反應體繫中含有1×buffer,0.12mmol/L dNTP,0.4μmol/L引物,3.5 mmol/L Mg2+,1.5U TaqDNA聚閤酶和40ng模闆DNA.對楊樹ISSR-PCR最佳反應體繫的退火溫度進行梯度試驗,髮現引物W95142的最適退火溫度為56.1℃,且最適退火溫度因引物而異.這一優化的ISSR-PCR反應體繫的建立為今後利用ISSR技術進行楊樹種質資源分類、遺傳圖譜構建和基因定位奠定瞭技術基礎.
채용정교설계적방법,대양수ISSR-PCR반응중5개인소(Taq매、Mg2+、모판DNA、dNTP화인물)재4개수평상진행우화시험.건립료괄합양수적기은정우능확출최다수량보대적ISSR-PCR최가반응체계,즉25μl적반응체계중함유1×buffer,0.12mmol/L dNTP,0.4μmol/L인물,3.5 mmol/L Mg2+,1.5U TaqDNA취합매화40ng모판DNA.대양수ISSR-PCR최가반응체계적퇴화온도진행제도시험,발현인물W95142적최괄퇴화온도위56.1℃,차최괄퇴화온도인인물이이.저일우화적ISSR-PCR반응체계적건립위금후이용ISSR기술진행양수충질자원분류、유전도보구건화기인정위전정료기술기출.
