中国食品学报
中國食品學報
중국식품학보
JOURNAL OF CHINESE INSTITUTE OF FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2007年
6期
6-12
,共7页
薛业敏%于瑾瑾%戴军%陈尚卫%邵蔚蓝
薛業敏%于瑾瑾%戴軍%陳尚衛%邵蔚藍
설업민%우근근%대군%진상위%소위람
双功能β-木糖苷酶%海栖热袍菌%表达%木聚糖水解%木糖
雙功能β-木糖苷酶%海棲熱袍菌%錶達%木聚糖水解%木糖
쌍공능β-목당감매%해서열포균%표체%목취당수해%목당
β-木糖苷酶在完全快速降解木聚糖类半纤维素为木糖的过程中起重要作用.海栖热袍菌(Thermotoga maritima)是一个极端嗜高温厌氧细菌,所产耐热酶类具有非常可观的工业应用前景,但这类酶在大肠杆菌中的表达很低.采用基因重组技术将源自海栖热袍菌的具有阿拉伯糖苷酶活性的耐热β-木糖苷酶基因克隆至表达载体pET-28a,与组氨酸标签融合表达构建重组质粒pET-28a-xyl,然后转化不同大肠杆菌宿主,结果在大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL中获得高效表达;重组酶蛋白经诱导表达、破胞和热处理后纯度在90%以上,经Ni2+亲和层析后达电泳纯;用HPLC和TLC检测酶解产物,β-木糖苷酶和木聚糖酶联合水解后,酶解产物主要为木糖,外加阿拉伯糖苷酶后能使其酶解产物中木糖含量明显提高.因此,具有阿拉伯糖苷酶活性的耐热β-木糖苷酶在木糖制备中具有重要的工业应用价值.
β-木糖苷酶在完全快速降解木聚糖類半纖維素為木糖的過程中起重要作用.海棲熱袍菌(Thermotoga maritima)是一箇極耑嗜高溫厭氧細菌,所產耐熱酶類具有非常可觀的工業應用前景,但這類酶在大腸桿菌中的錶達很低.採用基因重組技術將源自海棲熱袍菌的具有阿拉伯糖苷酶活性的耐熱β-木糖苷酶基因剋隆至錶達載體pET-28a,與組氨痠標籤融閤錶達構建重組質粒pET-28a-xyl,然後轉化不同大腸桿菌宿主,結果在大腸桿菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL中穫得高效錶達;重組酶蛋白經誘導錶達、破胞和熱處理後純度在90%以上,經Ni2+親和層析後達電泳純;用HPLC和TLC檢測酶解產物,β-木糖苷酶和木聚糖酶聯閤水解後,酶解產物主要為木糖,外加阿拉伯糖苷酶後能使其酶解產物中木糖含量明顯提高.因此,具有阿拉伯糖苷酶活性的耐熱β-木糖苷酶在木糖製備中具有重要的工業應用價值.
β-목당감매재완전쾌속강해목취당류반섬유소위목당적과정중기중요작용.해서열포균(Thermotoga maritima)시일개겁단기고온염양세균,소산내열매류구유비상가관적공업응용전경,단저류매재대장간균중적표체흔저.채용기인중조기술장원자해서열포균적구유아랍백당감매활성적내열β-목당감매기인극륭지표체재체pET-28a,여조안산표첨융합표체구건중조질립pET-28a-xyl,연후전화불동대장간균숙주,결과재대장간균BL21-CodonPlus(DE3)-RIL중획득고효표체;중조매단백경유도표체、파포화열처리후순도재90%이상,경Ni2+친화층석후체전영순;용HPLC화TLC검측매해산물,β-목당감매화목취당매연합수해후,매해산물주요위목당,외가아랍백당감매후능사기매해산물중목당함량명현제고.인차,구유아랍백당감매활성적내열β-목당감매재목당제비중구유중요적공업응용개치.
