昆虫学报
昆蟲學報
곤충학보
ACTA ENTOMOLOGICA SINICA
2008年
5期
486-491
,共6页
杨波%董小敏%蔡大威%刘志刚%胡征%汪浩勇%张珈敏%胡远扬
楊波%董小敏%蔡大威%劉誌剛%鬍徵%汪浩勇%張珈敏%鬍遠颺
양파%동소민%채대위%류지강%호정%왕호용%장가민%호원양
蟑螂浓核病毒%启动子%反式激活%昆虫细胞%表达载体
蟑螂濃覈病毒%啟動子%反式激活%昆蟲細胞%錶達載體
장랑농핵병독%계동자%반식격활%곤충세포%표체재체
为了研究蟑螂Periplaneta fuliginosa浓核病毒(pfDNV)非结构基因转录调控的机制,用PCR的方法从蟑螂浓核病毒基因组DNA中扩增了非结构蛋白基因ns3翻译起始密码子上游325 bp的启动子序列;并进一步以其作为模板,利用聚合酶链式反应技术,得到6个不同长度的启动子片段和两个定点突变体片段,构建由其驱动的萤火虫荧光素酶基因报告质粒,在脂质体介导下转染多种昆虫细胞,体外分析了该启动子的活性.结果表明: 该325 bp DNA片段在Sf9,S2,Tn368及Ld652细胞中均具有较高的启动子活性;其转录起始基序CAGT对维持该启动子的基本转录活性而言是必需的,而TATA盒对此则是非必需的,但它的存在可显著提高启动子的转录活性.同时,我们还发现,病毒非结构蛋白NS1对该启动子具有反式激活作用,并且这种激活作用的大小取决于NS1蛋白在细胞中的浓度.
為瞭研究蟑螂Periplaneta fuliginosa濃覈病毒(pfDNV)非結構基因轉錄調控的機製,用PCR的方法從蟑螂濃覈病毒基因組DNA中擴增瞭非結構蛋白基因ns3翻譯起始密碼子上遊325 bp的啟動子序列;併進一步以其作為模闆,利用聚閤酶鏈式反應技術,得到6箇不同長度的啟動子片段和兩箇定點突變體片段,構建由其驅動的螢火蟲熒光素酶基因報告質粒,在脂質體介導下轉染多種昆蟲細胞,體外分析瞭該啟動子的活性.結果錶明: 該325 bp DNA片段在Sf9,S2,Tn368及Ld652細胞中均具有較高的啟動子活性;其轉錄起始基序CAGT對維持該啟動子的基本轉錄活性而言是必需的,而TATA盒對此則是非必需的,但它的存在可顯著提高啟動子的轉錄活性.同時,我們還髮現,病毒非結構蛋白NS1對該啟動子具有反式激活作用,併且這種激活作用的大小取決于NS1蛋白在細胞中的濃度.
위료연구장랑Periplaneta fuliginosa농핵병독(pfDNV)비결구기인전록조공적궤제,용PCR적방법종장랑농핵병독기인조DNA중확증료비결구단백기인ns3번역기시밀마자상유325 bp적계동자서렬;병진일보이기작위모판,이용취합매련식반응기술,득도6개불동장도적계동자편단화량개정점돌변체편단,구건유기구동적형화충형광소매기인보고질립,재지질체개도하전염다충곤충세포,체외분석료해계동자적활성.결과표명: 해325 bp DNA편단재Sf9,S2,Tn368급Ld652세포중균구유교고적계동자활성;기전록기시기서CAGT대유지해계동자적기본전록활성이언시필수적,이TATA합대차칙시비필수적,단타적존재가현저제고계동자적전록활성.동시,아문환발현,병독비결구단백NS1대해계동자구유반식격활작용,병차저충격활작용적대소취결우NS1단백재세포중적농도.
