CAJ | 학술논문

目的在原核系统表达并初步鉴定细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因重组蛋白的抗原性.方法对已构建的重组质粒pMD-18T-EgTPx进行限制性酶切,获取目的基因片段后连接到表达质粒载体pET30a, 构建重组表达质粒pET30a-EgTPx,转化大肠杆菌DH5α.筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,对表达产物纯化后用Western-blot方法和ELISA鉴定重组EgTPx蛋白的抗原性.结果构建的重组表达质粒pET30a-EgTPx阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致,测序鉴定无基因突变,开放阅读框正确;含有pET30a-EgTPx重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为27 kDa,而且主要以包涵体形式存在;Western-blot和ELISA结果表明EgTPx重组抗原可以被棘球蚴感染羊阳性血清特异性识别.结论成功构建了pET30a-EgTPx表达质粒,EgTPx重组蛋白得到了高效表达,表达产物具有良好的抗原性.
목적 재원핵계통표체병초보감정세립극구조충류양환단백과양화물매(EgTPx)기인중조단백적항원성.방법 대이구건적중조질립pMD-18T-EgTPx진행한제성매절,획취목적 기인편단후련접도표체질립재체pET30a, 구건중조표체질립pET30a-EgTPx,전화대장간균DH5α.사선양성극륭,경한제성매절분석、PCR급측서감정후,전화대장간균BL21(DE3),이이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체.십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)분석표체산물,대표체산물순화후용Western-blot방법 화ELISA감정중조EgTPx단백적항원성.결과 구건적중조표체질립pET30a-EgTPx양성극륭경PCR여쌍매절감정,여예기결과 일치,측서감정무기인돌변,개방열독광정학;함유pET30a-EgTPx중조표체질립적대장간균BL21(DE3)유도후득도료고효표체,SDS-PAGE현시표체산물분자량약위27 kDa,이차주요이포함체형식존재;Western-blot화ELISA결과 표명EgTPx중조항원가이피극구유감염양양성혈청특이성식별.결론 성공구건료pET30a-EgTPx표체질립,EgTPx중조단백득도료고효표체,표체산물구유량호적항원성.