中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
9期
32-38
,共7页
孔路科%郭建巍%马骢%杨林西%魏杰%吴素香
孔路科%郭建巍%馬驄%楊林西%魏傑%吳素香
공로과%곽건외%마총%양림서%위걸%오소향
质粒介导的AmpC%β-内酰胺酶(pAmpCs)%生物信息学%抗原表位
質粒介導的AmpC%β-內酰胺酶(pAmpCs)%生物信息學%抗原錶位
질립개도적AmpC%β-내선알매(pAmpCs)%생물신식학%항원표위
目的:应用生物信息学方法预测质粒介导的AmpC β-内酰胺酶(pAmpCs)共有抗原表位,并实现pAmpCs共有抗原表位-Trx融合蛋白的原核表达、纯化和鉴定.方法 运用多序列比较工具找出各型质粒介导的AmpC β-内酰胺酶的共有相对保守区域,并利用分子生物学软件Biosun预测各亚型pAmpCs的可及性、抗原性、抗原表位、柔性、亲水性等参数,通过综合分析后找出其共有的抗原表位区域pAmpCs1.根据大肠杆菌的密码子偏好性,把氨基酸序列pAmpCs1转变为核苷酸序列pampcs1,采用重叠延伸PCR合成pampcs1片断,并构建原核表达载体pET32a(+)/pampcs1.通过测序验证,对含有该重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析后,用Ni-NTA亲和层析法纯化pAmpCs1-Trx融合蛋白,利用Western blot方法鉴定融合蛋白的抗原性.结果:根据预测结果找到了一段各型pAmpCs共有的抗原表位区域pAmpCs1,成功构建了原核表达载体pET32a(+)/pampcs1,经IPTG诱导后得到了分子量约为23kDa的融合蛋白,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,通过Western blot鉴定该蛋白能被抗AmpC β-lactamases多抗识别.结论:成功构建了pAmpCs1-Trx融合蛋白原核表达载体,并获得了高纯度的pAmpCs1-Trx融合蛋白,初步证明它的抗原性,为制备特异性抗体及建立快速检测方法打下了良好的基础.
目的:應用生物信息學方法預測質粒介導的AmpC β-內酰胺酶(pAmpCs)共有抗原錶位,併實現pAmpCs共有抗原錶位-Trx融閤蛋白的原覈錶達、純化和鑒定.方法 運用多序列比較工具找齣各型質粒介導的AmpC β-內酰胺酶的共有相對保守區域,併利用分子生物學軟件Biosun預測各亞型pAmpCs的可及性、抗原性、抗原錶位、柔性、親水性等參數,通過綜閤分析後找齣其共有的抗原錶位區域pAmpCs1.根據大腸桿菌的密碼子偏好性,把氨基痠序列pAmpCs1轉變為覈苷痠序列pampcs1,採用重疊延伸PCR閤成pampcs1片斷,併構建原覈錶達載體pET32a(+)/pampcs1.通過測序驗證,對含有該重組質粒的大腸桿菌BL21(DE3)進行誘導錶達,錶達產物經SDS-PAGE電泳分析後,用Ni-NTA親和層析法純化pAmpCs1-Trx融閤蛋白,利用Western blot方法鑒定融閤蛋白的抗原性.結果:根據預測結果找到瞭一段各型pAmpCs共有的抗原錶位區域pAmpCs1,成功構建瞭原覈錶達載體pET32a(+)/pampcs1,經IPTG誘導後得到瞭分子量約為23kDa的融閤蛋白,經Ni-NTA親和層析柱純化後,通過Western blot鑒定該蛋白能被抗AmpC β-lactamases多抗識彆.結論:成功構建瞭pAmpCs1-Trx融閤蛋白原覈錶達載體,併穫得瞭高純度的pAmpCs1-Trx融閤蛋白,初步證明它的抗原性,為製備特異性抗體及建立快速檢測方法打下瞭良好的基礎.
목적:응용생물신식학방법예측질립개도적AmpC β-내선알매(pAmpCs)공유항원표위,병실현pAmpCs공유항원표위-Trx융합단백적원핵표체、순화화감정.방법 운용다서렬비교공구조출각형질립개도적AmpC β-내선알매적공유상대보수구역,병이용분자생물학연건Biosun예측각아형pAmpCs적가급성、항원성、항원표위、유성、친수성등삼수,통과종합분석후조출기공유적항원표위구역pAmpCs1.근거대장간균적밀마자편호성,파안기산서렬pAmpCs1전변위핵감산서렬pampcs1,채용중첩연신PCR합성pampcs1편단,병구건원핵표체재체pET32a(+)/pampcs1.통과측서험증,대함유해중조질립적대장간균BL21(DE3)진행유도표체,표체산물경SDS-PAGE전영분석후,용Ni-NTA친화층석법순화pAmpCs1-Trx융합단백,이용Western blot방법감정융합단백적항원성.결과:근거예측결과조도료일단각형pAmpCs공유적항원표위구역pAmpCs1,성공구건료원핵표체재체pET32a(+)/pampcs1,경IPTG유도후득도료분자량약위23kDa적융합단백,경Ni-NTA친화층석주순화후,통과Western blot감정해단백능피항AmpC β-lactamases다항식별.결론:성공구건료pAmpCs1-Trx융합단백원핵표체재체,병획득료고순도적pAmpCs1-Trx융합단백,초보증명타적항원성,위제비특이성항체급건립쾌속검측방법타하료량호적기출.
