CAJ | 학술논문

将牛αS1-酪蛋白5′调控序列约1.2 kb的片段,连接到含SV40启动子调控下β-半乳糖苷酶基因(LaeZ)的PSV载体上,做为肩动子,在其后连接0.76kb的人仅α-乳白蛋白基凼(α-LA),构建真核表达载体αS1-LA-psv.采用组织块接种法,培养奶牛乳腺上皮细胞,经传代纯化后,对细胞接种存活率、群体倍增时间、生长曲线、形态学等生物学性状进行检测,用免疫荧光细胞染色法对培养的奶牛乳腺上皮细胞进行角蛋白18鉴定,结果表明,成功建立奶牛乳腺上皮细胞系,细胞传至20代以上时仍保持旺盛的增殖活力.将构建的真核表达载体αS1-LA-psv转染奶牛乳腺上皮细胞,培养24～120h均检测到了β-半乳糖苷酶的表达;培养72 h检测到细胞中人α-乳白蛋白的表达,表达量约为0.64 g/L.实验结果表明,建它的奶牛乳腺上皮细胞系具有外源基因表达活性,得到的牛αS1-酪蛋白5′调控序列能作为启动子指导外源基因的表达,构建的真核表达载体能在体外培养的牛乳腺上皮细胞中同时表达人α-乳白蛋白和β-半乳糖苷酶.
장우αS1-락단백5′조공서렬약1.2 kb적편단,련접도함SV40계동자조공하β-반유당감매기인(LaeZ)적PSV재체상,주위견동자,재기후련접0.76kb적인부α-유백단백기당(α-LA),구건진핵표체재체αS1-LA-psv.채용조직괴접충법,배양내우유선상피세포,경전대순화후,대세포접충존활솔、군체배증시간、생장곡선、형태학등생물학성상진행검측,용면역형광세포염색법대배양적내우유선상피세포진행각단백18감정,결과표명,성공건립내우유선상피세포계,세포전지20대이상시잉보지왕성적증식활력.장구건적진핵표체재체αS1-LA-psv전염내우유선상피세포,배양24～120h균검측도료β-반유당감매적표체;배양72 h검측도세포중인α-유백단백적표체,표체량약위0.64 g/L.실험결과표명,건타적내우유선상피세포계구유외원기인표체활성,득도적우αS1-락단백5′조공서렬능작위계동자지도외원기인적표체,구건적진핵표체재체능재체외배양적우유선상피세포중동시표체인α-유백단백화β-반유당감매.