上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2010年
7期
747-751
,共5页
赵彩霞%潘晓霞%冯晓蓓%隆琦%王伟铭%王朝晖%陈楠
趙綵霞%潘曉霞%馮曉蓓%隆琦%王偉銘%王朝暉%陳楠
조채하%반효하%풍효배%륭기%왕위명%왕조휘%진남
CD2相关蛋白%F-actin%表达载体%肾小球足细胞%突变
CD2相關蛋白%F-actin%錶達載體%腎小毬足細胞%突變
CD2상관단백%F-actin%표체재체%신소구족세포%돌변
目的 构建突变型CD2相关蛋白(CD2AP)荧光表达载体并转染肾小球足细胞,观察细胞内骨架蛋白F-actin分布的变化.方法 定点诱变真核表达质粒pcDNA6-V5-CD2AP致CD2AP第2外显子160G＞A杂合突变,测序鉴定.利用野生型和突变型质粒和pEGFP-C1荧光表达载体,分别构建野生型和突变型重组质粒pEGFP-C1-CD2AP荧光表达载体并转染小鼠肾小球足细胞,荧光显微镜观察处于不同细胞周期的足细胞内F-actin分布情况.结果 测序结果显示,pcDNA6-V5-CD2AP真核表达载体CD2AP的2号外显子第160位碱基G诱变为A,而其他碱基未发生改变.在细胞分裂间期,未转染足细胞内F-actin平行排列成纤维束;野生型重组质粒转染足细胞内F-actin在细胞核周围呈点、块状浓聚;而突变型重组质粒转染足细胞内F-actin主要在细胞膜上勾出轮廓.在细胞分裂中期,野生型重组质粒转染足细胞内F-acin纤维丝呈粗纤维状,环细胞浓聚;突变型重组质粒转染足细胞则仅见胞质内F-acin纤维丝增多,部分区域浓聚.结论 成功构建野生型和突变型重组CD2AP荧光表达载体.CD2AP基因160G＞A杂合突变使肾小球足细胞分裂间期和分裂中期的F-actin纤维骨架发生改变.
目的 構建突變型CD2相關蛋白(CD2AP)熒光錶達載體併轉染腎小毬足細胞,觀察細胞內骨架蛋白F-actin分佈的變化.方法 定點誘變真覈錶達質粒pcDNA6-V5-CD2AP緻CD2AP第2外顯子160G＞A雜閤突變,測序鑒定.利用野生型和突變型質粒和pEGFP-C1熒光錶達載體,分彆構建野生型和突變型重組質粒pEGFP-C1-CD2AP熒光錶達載體併轉染小鼠腎小毬足細胞,熒光顯微鏡觀察處于不同細胞週期的足細胞內F-actin分佈情況.結果 測序結果顯示,pcDNA6-V5-CD2AP真覈錶達載體CD2AP的2號外顯子第160位堿基G誘變為A,而其他堿基未髮生改變.在細胞分裂間期,未轉染足細胞內F-actin平行排列成纖維束;野生型重組質粒轉染足細胞內F-actin在細胞覈週圍呈點、塊狀濃聚;而突變型重組質粒轉染足細胞內F-actin主要在細胞膜上勾齣輪廓.在細胞分裂中期,野生型重組質粒轉染足細胞內F-acin纖維絲呈粗纖維狀,環細胞濃聚;突變型重組質粒轉染足細胞則僅見胞質內F-acin纖維絲增多,部分區域濃聚.結論 成功構建野生型和突變型重組CD2AP熒光錶達載體.CD2AP基因160G＞A雜閤突變使腎小毬足細胞分裂間期和分裂中期的F-actin纖維骨架髮生改變.
목적 구건돌변형CD2상관단백(CD2AP)형광표체재체병전염신소구족세포,관찰세포내골가단백F-actin분포적변화.방법 정점유변진핵표체질립pcDNA6-V5-CD2AP치CD2AP제2외현자160G＞A잡합돌변,측서감정.이용야생형화돌변형질립화pEGFP-C1형광표체재체,분별구건야생형화돌변형중조질립pEGFP-C1-CD2AP형광표체재체병전염소서신소구족세포,형광현미경관찰처우불동세포주기적족세포내F-actin분포정황.결과 측서결과현시,pcDNA6-V5-CD2AP진핵표체재체CD2AP적2호외현자제160위감기G유변위A,이기타감기미발생개변.재세포분렬간기,미전염족세포내F-actin평행배렬성섬유속;야생형중조질립전염족세포내F-actin재세포핵주위정점、괴상농취;이돌변형중조질립전염족세포내F-actin주요재세포막상구출륜곽.재세포분렬중기,야생형중조질립전염족세포내F-acin섬유사정조섬유상,배세포농취;돌변형중조질립전염족세포칙부견포질내F-acin섬유사증다,부분구역농취.결론 성공구건야생형화돌변형중조CD2AP형광표체재체.CD2AP기인160G＞A잡합돌변사신소구족세포분렬간기화분렬중기적F-actin섬유골가발생개변.
