中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2010年
11期
80-84
,共5页
杜涛峰%韩文瑜%雷连成%孙长江%李扬%顾敬敏%许会会
杜濤峰%韓文瑜%雷連成%孫長江%李颺%顧敬敏%許會會
두도봉%한문유%뢰련성%손장강%리양%고경민%허회회
牛种布鲁菌%羊种布鲁菌%BCSP31基因%IS711基因%多重PCR
牛種佈魯菌%羊種佈魯菌%BCSP31基因%IS711基因%多重PCR
우충포로균%양충포로균%BCSP31기인%IS711기인%다중PCR
根据布鲁菌属特异性基因BCSP31和布鲁菌种间特异性标志IS711插入序列,设计合成了3对引物,以牛种布鲁菌544A、104M和羊种布鲁菌1 6M基因组DNA为模板,通过优化反应条件,建立了可同时检测布鲁菌属、牛种布鲁菌和羊种布鲁菌的多重PCR方法.牛种布鲁菌可扩增出301和114 bp 2条带,羊种布鲁菌可扩增出301和253 bp 2条带,该方法对牛种布鲁菌544A和羊种布鲁菌16M混合DNA模板的最小检出量为100 pg,对大肠杆菌O157;H7、小肠结肠炎耶尔森菌等15种参照菌的核酸扩增结果均为阴性.应用该方法对吉林省某牛场的106份粪便进行检测,虎红平板凝集试验作对照,结果PCR检测9份为阳性,且全为牛种布鲁菌阳性,对应的虎红平板凝集试验也为阳性.结果表明,建立的多重PCR方法具有良好的敏感性和特异性.为布鲁菌病的鉴别诊断提供了一种分子检测工具.
根據佈魯菌屬特異性基因BCSP31和佈魯菌種間特異性標誌IS711插入序列,設計閤成瞭3對引物,以牛種佈魯菌544A、104M和羊種佈魯菌1 6M基因組DNA為模闆,通過優化反應條件,建立瞭可同時檢測佈魯菌屬、牛種佈魯菌和羊種佈魯菌的多重PCR方法.牛種佈魯菌可擴增齣301和114 bp 2條帶,羊種佈魯菌可擴增齣301和253 bp 2條帶,該方法對牛種佈魯菌544A和羊種佈魯菌16M混閤DNA模闆的最小檢齣量為100 pg,對大腸桿菌O157;H7、小腸結腸炎耶爾森菌等15種參照菌的覈痠擴增結果均為陰性.應用該方法對吉林省某牛場的106份糞便進行檢測,虎紅平闆凝集試驗作對照,結果PCR檢測9份為暘性,且全為牛種佈魯菌暘性,對應的虎紅平闆凝集試驗也為暘性.結果錶明,建立的多重PCR方法具有良好的敏感性和特異性.為佈魯菌病的鑒彆診斷提供瞭一種分子檢測工具.
근거포로균속특이성기인BCSP31화포로균충간특이성표지IS711삽입서렬,설계합성료3대인물,이우충포로균544A、104M화양충포로균1 6M기인조DNA위모판,통과우화반응조건,건립료가동시검측포로균속、우충포로균화양충포로균적다중PCR방법.우충포로균가확증출301화114 bp 2조대,양충포로균가확증출301화253 bp 2조대,해방법대우충포로균544A화양충포로균16M혼합DNA모판적최소검출량위100 pg,대대장간균O157;H7、소장결장염야이삼균등15충삼조균적핵산확증결과균위음성.응용해방법대길림성모우장적106빈분편진행검측,호홍평판응집시험작대조,결과PCR검측9빈위양성,차전위우충포로균양성,대응적호홍평판응집시험야위양성.결과표명,건립적다중PCR방법구유량호적민감성화특이성.위포로균병적감별진단제공료일충분자검측공구.
