CAJ | 학술논문

[目的]通过诱导表达香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414,研究其对小鼠肝癌细胞Hca的生物学功能影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的机制.[方法]构建真核重组表达质粒pPIC9K-24414,用毕赤酵母GS115体系进行诱导表达,将已鉴定的诱导表达蛋白作用于小鼠肝癌细胞Hea,用MTT法测定不同浓度目的蛋白组、顺铂(DDP)组及空白对照组的抑瘤率,用流式细胞术检测目的蛋白对肿瘤细胞的凋亡作用,同时用MTT法检测目的蛋白对正常鸡胚成纤维细胞的毒性作用.[结果] Western-blot结果显示目的蛋白成功表达；MTT法检测结果显示,不同浓度此蛋白对Hca细胞的生长抑制作用(OD595)与对照组比较差异均有显著性意义(P＜0.05),7.5 μg/mL、15 μg/mL和30μg/mL目的蛋白的最大抑瘤率分别为70.03％、82.02％和74.66％,均超过5μg/mL DDP的作用；流式细胞术结果显示,此蛋白具有诱导Hca细胞凋亡的能力,早晚双期细胞凋亡诱导率与对照组比较差异均有显著性意义(P＜0.05),浓度为30 μg/mL时诱导凋亡的作用最强,早晚两期凋亡率分别为(9.28±0.04)％和(9.37±0.03)％;同时此蛋白对正常细胞无毒性作用.[结论]香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414在毕赤酵母GSll5中成功诱导表达,此蛋白对小鼠肝癌细胞Hca生长具有抑制作用,能够诱导其产生凋亡,为进一步深入研究香菇菌C91-3的抗肿瘤机制奠定了基础.
[목적]통과유도표체향고균C91-3조망상관단백24414,연구기대소서간암세포Hca적생물학공능영향,탐토기유도종류세포조망적궤제.[방법]구건진핵중조표체질립pPIC9K-24414,용필적효모GS115체계진행유도표체,장이감정적유도표체단백작용우소서간암세포Hea,용MTT법측정불동농도목적단백조、순박(DDP)조급공백대조조적억류솔,용류식세포술검측목적단백대종류세포적조망작용,동시용MTT법검측목적단백대정상계배성섬유세포적독성작용.[결과] Western-blot결과현시목적단백성공표체；MTT법검측결과현시,불동농도차단백대Hca세포적생장억제작용(OD595)여대조조비교차이균유현저성의의(P＜0.05),7.5 μg/mL、15 μg/mL화30μg/mL목적단백적최대억류솔분별위70.03％、82.02％화74.66％,균초과5μg/mL DDP적작용；류식세포술결과현시,차단백구유유도Hca세포조망적능력,조만쌍기세포조망유도솔여대조조비교차이균유현저성의의(P＜0.05),농도위30 μg/mL시유도조망적작용최강,조만량기조망솔분별위(9.28±0.04)％화(9.37±0.03)％;동시차단백대정상세포무독성작용.[결론]향고균C91-3조망상관단백24414재필적효모GSll5중성공유도표체,차단백대소서간암세포Hca생장구유억제작용,능구유도기산생조망,위진일보심입연구향고균C91-3적항종류궤제전정료기출.