天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2012年
6期
533-536
,共4页
张剑%赵秀%杨德琴%顾瑜%吴家媛%刘建国
張劍%趙秀%楊德琴%顧瑜%吳傢媛%劉建國
장검%조수%양덕금%고유%오가원%류건국
链球菌,酿脓%糖基转移酶类%霍乱毒素%膜蛋白质类%质粒%嵌合状态%原核细胞
鏈毬菌,釀膿%糖基轉移酶類%霍亂毒素%膜蛋白質類%質粒%嵌閤狀態%原覈細胞
련구균,양농%당기전이매류%곽란독소%막단백질류%질립%감합상태%원핵세포
目的:构建含变形链球菌表面蛋白A区编码基因(pacA)、葡糖基转移酶催化区编码基因(gtfB-cat)及霍乱毒素B亚单位编码基因(ctxB)的嵌合表达质粒并表达目的蛋白.方法:将目的基因pacA、gtfB-cat、ctxB克隆至原核克隆载体pET32-a(+)构建嵌合质粒pET-pacA-cat-ctxB,将其转入表达宿主菌E.coliBL21(DE3),并测量其表达情况.结果:构建的重组质粒经酶切、PCR鉴定及测序,证实目的基因均正确插入到载体pET-32a(+)中,插入的相位正确,未改变目的基因的阅读框架,经诱导后表达目的蛋白,分子质量大小与预期一致.结论:成功构建了嵌合质粒pET-pa-cA-cat-ctxB,且它们均在原核细胞内获得正确表达.
目的:構建含變形鏈毬菌錶麵蛋白A區編碼基因(pacA)、葡糖基轉移酶催化區編碼基因(gtfB-cat)及霍亂毒素B亞單位編碼基因(ctxB)的嵌閤錶達質粒併錶達目的蛋白.方法:將目的基因pacA、gtfB-cat、ctxB剋隆至原覈剋隆載體pET32-a(+)構建嵌閤質粒pET-pacA-cat-ctxB,將其轉入錶達宿主菌E.coliBL21(DE3),併測量其錶達情況.結果:構建的重組質粒經酶切、PCR鑒定及測序,證實目的基因均正確插入到載體pET-32a(+)中,插入的相位正確,未改變目的基因的閱讀框架,經誘導後錶達目的蛋白,分子質量大小與預期一緻.結論:成功構建瞭嵌閤質粒pET-pa-cA-cat-ctxB,且它們均在原覈細胞內穫得正確錶達.
목적:구건함변형련구균표면단백A구편마기인(pacA)、포당기전이매최화구편마기인(gtfB-cat)급곽란독소B아단위편마기인(ctxB)적감합표체질립병표체목적단백.방법:장목적기인pacA、gtfB-cat、ctxB극륭지원핵극륭재체pET32-a(+)구건감합질립pET-pacA-cat-ctxB,장기전입표체숙주균E.coliBL21(DE3),병측량기표체정황.결과:구건적중조질립경매절、PCR감정급측서,증실목적기인균정학삽입도재체pET-32a(+)중,삽입적상위정학,미개변목적기인적열독광가,경유도후표체목적단백,분자질량대소여예기일치.결론:성공구건료감합질립pET-pa-cA-cat-ctxB,차타문균재원핵세포내획득정학표체.
