生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2003年
5期
566-571
,共6页
汤慕瑾%袁美妗%陈建武%师永霞%曾少灵%余健秀%庞义
湯慕瑾%袁美妗%陳建武%師永霞%曾少靈%餘健秀%龐義
탕모근%원미금%진건무%사영하%증소령%여건수%방의
苏云金杆菌,p20 基因,cry1Ab基因,表达
囌雲金桿菌,p20 基因,cry1Ab基因,錶達
소운금간균,p20 기인,cry1Ab기인,표체
苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis, 简称Bt)杀虫晶体蛋白Cry1Ab因其C-半端缺少了一段含4个半胱氨酸的氨基酸序列而导致蛋白的不稳定,报道苏云金杆菌辅助蛋白P20帮助Cry1Ab蛋白的表达及晶体的形成.利用穿梭载体pHT3101构建3个表达质粒,即pT1B、pP1B和pDP1B,3个质粒都含有cry1Ab基因,不同在于pT1B没有p20基因,pP1B含有p20全基因,而pDP1B不仅含有p20全基因,且在p20基因前插入cry1A(c)启动子.分别将这3个表达质粒经电转化到苏云金杆菌晶体缺陷型菌株CryB中,获得转化菌株T1B、P1B和DP1B.Western blot表明cry1Ab基因在这3株菌中均表达了130 kD的蛋白,部分降解为大约60 kD的蛋白.蛋白定量分析显示,3株菌130 kD蛋白量的比为1∶1.4∶1.5,降解后的60 kD蛋白量的比为1∶1.1∶1.6,Cry1Ab蛋白总量的比为1∶1∶2∶1.6.镜检发现,Cry1Ab在3株菌中都形成典型的菱形晶体,其晶体大小为T1B〈P1B〈DP1B.生物测定结果显示,3个菌株对棉铃虫(Helicoverpa armigera)均具有明显的杀虫活性,三者的LC50差异不显著.研究表明,P20对cry1Ab基因的表达和晶体形成均有帮助,P20表达量的多少可能是导致Cry1Ab蛋白最终产量有所不同的因素.
囌雲金桿菌(Bacillus thuringiensis, 簡稱Bt)殺蟲晶體蛋白Cry1Ab因其C-半耑缺少瞭一段含4箇半胱氨痠的氨基痠序列而導緻蛋白的不穩定,報道囌雲金桿菌輔助蛋白P20幫助Cry1Ab蛋白的錶達及晶體的形成.利用穿梭載體pHT3101構建3箇錶達質粒,即pT1B、pP1B和pDP1B,3箇質粒都含有cry1Ab基因,不同在于pT1B沒有p20基因,pP1B含有p20全基因,而pDP1B不僅含有p20全基因,且在p20基因前插入cry1A(c)啟動子.分彆將這3箇錶達質粒經電轉化到囌雲金桿菌晶體缺陷型菌株CryB中,穫得轉化菌株T1B、P1B和DP1B.Western blot錶明cry1Ab基因在這3株菌中均錶達瞭130 kD的蛋白,部分降解為大約60 kD的蛋白.蛋白定量分析顯示,3株菌130 kD蛋白量的比為1∶1.4∶1.5,降解後的60 kD蛋白量的比為1∶1.1∶1.6,Cry1Ab蛋白總量的比為1∶1∶2∶1.6.鏡檢髮現,Cry1Ab在3株菌中都形成典型的蔆形晶體,其晶體大小為T1B〈P1B〈DP1B.生物測定結果顯示,3箇菌株對棉鈴蟲(Helicoverpa armigera)均具有明顯的殺蟲活性,三者的LC50差異不顯著.研究錶明,P20對cry1Ab基因的錶達和晶體形成均有幫助,P20錶達量的多少可能是導緻Cry1Ab蛋白最終產量有所不同的因素.
소운금간균(Bacillus thuringiensis, 간칭Bt)살충정체단백Cry1Ab인기C-반단결소료일단함4개반광안산적안기산서렬이도치단백적불은정,보도소운금간균보조단백P20방조Cry1Ab단백적표체급정체적형성.이용천사재체pHT3101구건3개표체질립,즉pT1B、pP1B화pDP1B,3개질립도함유cry1Ab기인,불동재우pT1B몰유p20기인,pP1B함유p20전기인,이pDP1B불부함유p20전기인,차재p20기인전삽입cry1A(c)계동자.분별장저3개표체질립경전전화도소운금간균정체결함형균주CryB중,획득전화균주T1B、P1B화DP1B.Western blot표명cry1Ab기인재저3주균중균표체료130 kD적단백,부분강해위대약60 kD적단백.단백정량분석현시,3주균130 kD단백량적비위1∶1.4∶1.5,강해후적60 kD단백량적비위1∶1.1∶1.6,Cry1Ab단백총량적비위1∶1∶2∶1.6.경검발현,Cry1Ab재3주균중도형성전형적릉형정체,기정체대소위T1B〈P1B〈DP1B.생물측정결과현시,3개균주대면령충(Helicoverpa armigera)균구유명현적살충활성,삼자적LC50차이불현저.연구표명,P20대cry1Ab기인적표체화정체형성균유방조,P20표체량적다소가능시도치Cry1Ab단백최종산량유소불동적인소.
