生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2005年
6期
598-601
,共4页
核酶%反式剪接%修复%绿色荧光蛋白
覈酶%反式剪接%脩複%綠色熒光蛋白
핵매%반식전접%수복%록색형광단백
为构建修复突变绿色荧光蛋白(GFP)基因的反式剪接核酶,分别构建包含突变的GFP基因的XYQ5/10-pGEM重组质粒、XYQ5/10-pEGFP-C2重组质粒及用于修复该突变基因的反式剪接核酶载体trans-rib-CMV2.通过对体外共转录XYQ5/10-pGEM和trans-rib-CMV2重组质粒的RNA产物进行RT-PCR检测核酶细胞外剪接效果;通过XYQ5/10-pEGFP-C2和trans-rib-CMV2重组质粒共转染HeLa细胞检测核酶细胞内的剪接效果.结果显示,XYQ5/10-pGEM、XYQ5/10-pEGFP-C2及trans-rib-CMV2重组质粒构建成功,反式剪接核酶在细胞外及细胞内都可以修复突变基因.虽然效率不高,但为今后更大规模地研究设计反式剪接核酶打下了基础.
為構建脩複突變綠色熒光蛋白(GFP)基因的反式剪接覈酶,分彆構建包含突變的GFP基因的XYQ5/10-pGEM重組質粒、XYQ5/10-pEGFP-C2重組質粒及用于脩複該突變基因的反式剪接覈酶載體trans-rib-CMV2.通過對體外共轉錄XYQ5/10-pGEM和trans-rib-CMV2重組質粒的RNA產物進行RT-PCR檢測覈酶細胞外剪接效果;通過XYQ5/10-pEGFP-C2和trans-rib-CMV2重組質粒共轉染HeLa細胞檢測覈酶細胞內的剪接效果.結果顯示,XYQ5/10-pGEM、XYQ5/10-pEGFP-C2及trans-rib-CMV2重組質粒構建成功,反式剪接覈酶在細胞外及細胞內都可以脩複突變基因.雖然效率不高,但為今後更大規模地研究設計反式剪接覈酶打下瞭基礎.
위구건수복돌변록색형광단백(GFP)기인적반식전접핵매,분별구건포함돌변적GFP기인적XYQ5/10-pGEM중조질립、XYQ5/10-pEGFP-C2중조질립급용우수복해돌변기인적반식전접핵매재체trans-rib-CMV2.통과대체외공전록XYQ5/10-pGEM화trans-rib-CMV2중조질립적RNA산물진행RT-PCR검측핵매세포외전접효과;통과XYQ5/10-pEGFP-C2화trans-rib-CMV2중조질립공전염HeLa세포검측핵매세포내적전접효과.결과현시,XYQ5/10-pGEM、XYQ5/10-pEGFP-C2급trans-rib-CMV2중조질립구건성공,반식전접핵매재세포외급세포내도가이수복돌변기인.수연효솔불고,단위금후경대규모지연구설계반식전접핵매타하료기출.
