生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2007年
3期
44-46
,共3页
金发藓%ISSR-PCR%正交设计%反应体系
金髮蘚%ISSR-PCR%正交設計%反應體繫
금발선%ISSR-PCR%정교설계%반응체계
目的:建立金发藓科植物ISSR-PCR反应的最佳体系.方法:利用正交设计的方法,对金发藓科植物(Polytrichaceae)ISSR-PCR反应的5因素(Mg2+,dNTP,primer,DNA template,Taq DNA polymerase)4水平进行试验.结果:在20μl反应体系中,模板DNA 50ng,1.6μmol/L的引物,1 ×反应缓冲液,3.2mmol/L的Mg2+,dNTP为1.2mmol/L,2U的Taq DNA聚合酶,反应程序为94℃预变性6min;94℃变性45s,57℃退火45s,72℃延伸2min,循环40次;72℃延伸10min.利用此结论,对20种金发藓科植物进行ISSR -PCR扩增,扩增产物的多态性为69.52%.利用引物841构建的指纹图谱,可区分20种金发藓科植物中的18种,分辨率达90%.金发藓科植物ISSR-PCR反应体系的建立,为今后利用ISSR标记技术开展金发藓科植物种间遗传多样性分析提供一个标准化程序.
目的:建立金髮蘚科植物ISSR-PCR反應的最佳體繫.方法:利用正交設計的方法,對金髮蘚科植物(Polytrichaceae)ISSR-PCR反應的5因素(Mg2+,dNTP,primer,DNA template,Taq DNA polymerase)4水平進行試驗.結果:在20μl反應體繫中,模闆DNA 50ng,1.6μmol/L的引物,1 ×反應緩遲液,3.2mmol/L的Mg2+,dNTP為1.2mmol/L,2U的Taq DNA聚閤酶,反應程序為94℃預變性6min;94℃變性45s,57℃退火45s,72℃延伸2min,循環40次;72℃延伸10min.利用此結論,對20種金髮蘚科植物進行ISSR -PCR擴增,擴增產物的多態性為69.52%.利用引物841構建的指紋圖譜,可區分20種金髮蘚科植物中的18種,分辨率達90%.金髮蘚科植物ISSR-PCR反應體繫的建立,為今後利用ISSR標記技術開展金髮蘚科植物種間遺傳多樣性分析提供一箇標準化程序.
목적:건립금발선과식물ISSR-PCR반응적최가체계.방법:이용정교설계적방법,대금발선과식물(Polytrichaceae)ISSR-PCR반응적5인소(Mg2+,dNTP,primer,DNA template,Taq DNA polymerase)4수평진행시험.결과:재20μl반응체계중,모판DNA 50ng,1.6μmol/L적인물,1 ×반응완충액,3.2mmol/L적Mg2+,dNTP위1.2mmol/L,2U적Taq DNA취합매,반응정서위94℃예변성6min;94℃변성45s,57℃퇴화45s,72℃연신2min,순배40차;72℃연신10min.이용차결론,대20충금발선과식물진행ISSR -PCR확증,확증산물적다태성위69.52%.이용인물841구건적지문도보,가구분20충금발선과식물중적18충,분변솔체90%.금발선과식물ISSR-PCR반응체계적건립,위금후이용ISSR표기기술개전금발선과식물충간유전다양성분석제공일개표준화정서.
