中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
9期
41-46
,共6页
荧光素酶%生物素羧基载体蛋白%生物素酰化%融和表达%固定化
熒光素酶%生物素羧基載體蛋白%生物素酰化%融和錶達%固定化
형광소매%생물소최기재체단백%생물소선화%융화표체%고정화
为了在体内实现萤火虫荧光素酶的生物素酰化修饰,将大肠杆菌中编码生物素羧基载体蛋白(biotin carboxyl carrier protein,BCCP)C端87个氨基酸的功能域基因融合到萤火虫(Pyrocoelia pectoralis)荧光素酶cDNA的末端.经大肠杆菌生物素合成酶(biotin holoenzyme synthetase)的催化,生物素与BCCP上特定的赖氨酸(Lys)残基共价结合,由此与BCCP融合的萤火虫荧光素酶间接实现了生物素化的修饰.利用生物素与配体亲和素或链霉亲和素的特异性耦合,可以将荧光素酶固定到亲和素或链霉亲和素包被的磁珠上,从而使荧光检测的应用更加灵活和方便.讨论了生物素化荧光素酶的克隆、表达以及功能检测.
為瞭在體內實現螢火蟲熒光素酶的生物素酰化脩飾,將大腸桿菌中編碼生物素羧基載體蛋白(biotin carboxyl carrier protein,BCCP)C耑87箇氨基痠的功能域基因融閤到螢火蟲(Pyrocoelia pectoralis)熒光素酶cDNA的末耑.經大腸桿菌生物素閤成酶(biotin holoenzyme synthetase)的催化,生物素與BCCP上特定的賴氨痠(Lys)殘基共價結閤,由此與BCCP融閤的螢火蟲熒光素酶間接實現瞭生物素化的脩飾.利用生物素與配體親和素或鏈黴親和素的特異性耦閤,可以將熒光素酶固定到親和素或鏈黴親和素包被的磁珠上,從而使熒光檢測的應用更加靈活和方便.討論瞭生物素化熒光素酶的剋隆、錶達以及功能檢測.
위료재체내실현형화충형광소매적생물소선화수식,장대장간균중편마생물소최기재체단백(biotin carboxyl carrier protein,BCCP)C단87개안기산적공능역기인융합도형화충(Pyrocoelia pectoralis)형광소매cDNA적말단.경대장간균생물소합성매(biotin holoenzyme synthetase)적최화,생물소여BCCP상특정적뢰안산(Lys)잔기공개결합,유차여BCCP융합적형화충형광소매간접실현료생물소화적수식.이용생물소여배체친화소혹련매친화소적특이성우합,가이장형광소매고정도친화소혹련매친화소포피적자주상,종이사형광검측적응용경가령활화방편.토론료생물소화형광소매적극륭、표체이급공능검측.
