中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
8期
69-73
,共5页
马赛箭%苏乔%吴凇%安利佳
馬賽箭%囌喬%吳凇%安利佳
마새전%소교%오송%안리가
磷酸乙醇胺N-甲基转移酶%锚定PCR%启动子%序列分析%瞬时表达
燐痠乙醇胺N-甲基轉移酶%錨定PCR%啟動子%序列分析%瞬時錶達
린산을순알N-갑기전이매%묘정PCR%계동자%서렬분석%순시표체
磷酸胆碱是合成磷脂酰胆碱和甘氨酸甜菜碱的重要前体,磷酸乙醇胺N-甲基转移酶(PEAMT)是磷酸胆碱合成的关键酶.根据已知的SePEAMT cDNA5′端序列设计2个基因特异的反向引物(PP1,PP2),通过锚定PCR获得了PEAMT起始密码子上游1249bp的序列.RLM-RACE反应确定其转录起始位点A位于起始密码子上游301bp处,由此获得了948bp的SePEAMT启动子序列.PlantCARE和PLACE在线启动子预测工具分析表明:该序列除了含有启动子的基本元件TATA-box和CAAT-box外,还含有一些胁迫诱导元件(如ABRE、HSE、LTR)和花粉特异的激活元件AGAAA.构建了SePEAMT启动子与报告基因GUS 融合的表达载体pPro,并通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草,染色结果表明SePEAMT启动子可以有效地驱动GUS基因的瞬时表达.
燐痠膽堿是閤成燐脂酰膽堿和甘氨痠甜菜堿的重要前體,燐痠乙醇胺N-甲基轉移酶(PEAMT)是燐痠膽堿閤成的關鍵酶.根據已知的SePEAMT cDNA5′耑序列設計2箇基因特異的反嚮引物(PP1,PP2),通過錨定PCR穫得瞭PEAMT起始密碼子上遊1249bp的序列.RLM-RACE反應確定其轉錄起始位點A位于起始密碼子上遊301bp處,由此穫得瞭948bp的SePEAMT啟動子序列.PlantCARE和PLACE在線啟動子預測工具分析錶明:該序列除瞭含有啟動子的基本元件TATA-box和CAAT-box外,還含有一些脅迫誘導元件(如ABRE、HSE、LTR)和花粉特異的激活元件AGAAA.構建瞭SePEAMT啟動子與報告基因GUS 融閤的錶達載體pPro,併通過農桿菌介導的葉盤法轉化煙草,染色結果錶明SePEAMT啟動子可以有效地驅動GUS基因的瞬時錶達.
린산담감시합성린지선담감화감안산첨채감적중요전체,린산을순알N-갑기전이매(PEAMT)시린산담감합성적관건매.근거이지적SePEAMT cDNA5′단서렬설계2개기인특이적반향인물(PP1,PP2),통과묘정PCR획득료PEAMT기시밀마자상유1249bp적서렬.RLM-RACE반응학정기전록기시위점A위우기시밀마자상유301bp처,유차획득료948bp적SePEAMT계동자서렬.PlantCARE화PLACE재선계동자예측공구분석표명:해서렬제료함유계동자적기본원건TATA-box화CAAT-box외,환함유일사협박유도원건(여ABRE、HSE、LTR)화화분특이적격활원건AGAAA.구건료SePEAMT계동자여보고기인GUS 융합적표체재체pPro,병통과농간균개도적협반법전화연초,염색결과표명SePEAMT계동자가이유효지구동GUS기인적순시표체.
