CAJ | 학술논문

背景:椎间盘退行性变的理想治疗方法是利用组织工程技术修复退行性变的椎间盘,而修复所需的髓核细胞来源十分有限.目的:观察在藻酸盐微球的介导下,髓核细胞与骨髓间充质十细胞非接触共培养时,髓核细胞对骨髓间充质干细胞的诱导作用.设计、时间及地点:细胞学体外观察,实验于2007-10/2008-08在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室和中心实验室进行.材料:4月龄健康新两兰大耳白兔5只,取髓核细胞与骨髓间充质干细胞原代培养,利用传代法分离纯化.方法:①将纯化的骨髓间充质干细胞经胰蛋白酶消化、收集,并与适量的藻酸钠溶液混合,形成109 L-1的单细胞悬液,将混合好的单细胞悬液经注射器滴加至35 g/L的CaCl2溶液中,形成海藻酸钙凝胶珠.②将海藻酸钠凝胶微球与髓核细胞共培养.在7 d和15 d时,分组溶解海藻酸钙凝胶珠.收集骨髓间充质干细胞.主要观察指标:利用免疫组化技术、RT-PCR技术和Western blot技术检测骨髓间充质干细胞中Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达,用以判断髓核细胞对骨髓间充质干细胞在非接触条件下的诱导作用.结果:在骨髓间充质干细胞的细胞爬片免疫组化染色中可见,Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖染色阳性,RT-PCR和Western blot 结果显示经诱导后骨髓间充质干细胞中已有Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖基因的表达,且诱导15 d组的目的条带明显亮于诱导7 d组的目的条带.结论:在藻酸盐微球的介导下,体外非接触共同培养时髓核细胞能够实现对骨髓间充质干细胞的诱导作用.
배경:추간반퇴행성변적이상치료방법시이용조직공정기술수복퇴행성변적추간반,이수복소수적수핵세포래원십분유한.목적:관찰재조산염미구적개도하,수핵세포여골수간충질십세포비접촉공배양시,수핵세포대골수간충질간세포적유도작용.설계、시간급지점:세포학체외관찰,실험우2007-10/2008-08재화중과기대학동제의학원부속동제의원골과실험실화중심실험실진행.재료:4월령건강신량란대이백토5지,취수핵세포여골수간충질간세포원대배양,이용전대법분리순화.방법:①장순화적골수간충질간세포경이단백매소화、수집,병여괄량적조산납용액혼합,형성109 L-1적단세포현액,장혼합호적단세포현액경주사기적가지35 g/L적CaCl2용액중,형성해조산개응효주.②장해조산납응효미구여수핵세포공배양.재7 d화15 d시,분조용해해조산개응효주.수집골수간충질간세포.주요관찰지표:이용면역조화기술、RT-PCR기술화Western blot기술검측골수간충질간세포중Ⅱ형효원화취집단백취당적표체,용이판단수핵세포대골수간충질간세포재비접촉조건하적유도작용.결과:재골수간충질간세포적세포파편면역조화염색중가견,Ⅱ형효원화취집단백취당염색양성,RT-PCR화Western blot 결과현시경유도후골수간충질간세포중이유Ⅱ형효원화취집단백취당기인적표체,차유도15 d조적목적조대명현량우유도7 d조적목적조대.결론:재조산염미구적개도하,체외비접촉공동배양시수핵세포능구실현대골수간충질간세포적유도작용.