浙江大学学报(医学版)
浙江大學學報(醫學版)
절강대학학보(의학판)
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2010年
3期
296-304
,共9页
核酸探针%胶体金%磁力学%微球体%光谱法,质量,基质辅助激光解吸电离%纳米技术
覈痠探針%膠體金%磁力學%微毬體%光譜法,質量,基質輔助激光解吸電離%納米技術
핵산탐침%효체금%자역학%미구체%광보법,질량,기질보조격광해흡전리%납미기술
目的:制备一种新型的双功能化胶体金纳米探针,并考察其特异性.方法:选择二硫化物分子和甲型流感病毒(H1N1亚型)HA基因中特异性的23 mer寡核苷酸片段组装到胶体金颗粒表面,制成双功能化胶体金纳米探针(识别探针,颜色呈酒红色);利用磁性微球作为固相支持物,偶联另一段特异性H1N1寡核苷酸片段制成捕捉探针;两者与靶DNA(完全匹配DNA)结合,形成无色的捕捉探针-靶DNA-识别探针("三明治"夹心式复合物),并采用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI TOF MS)测定.同时,在选择向体系中分别加入超纯水(作为空白对照)、完全匹配DNA、不完全匹配DNA及2条仅有1个碱基错配的DNA片段作为靶目标进行实验,观察体系颜色变化及质谱测定,考察探针的特异性.结果:捕捉探针和识别探针只能与完全匹配DNA结合,形成夹心式复合物,反应体系颜色由酒红色转变为无色,充分洗涤后加热去杂交,则由无色复呈酒红色,质谱检测出现信号(m/z 693);而其他靶目标(不完全匹配DNA及2条仅有1个碱基错配的DNA片段)和空白对照实验,不能与2种探针形成夹心式复合物,反应体系均没有颜色变化(仍呈现酒红色),充分洗涤后体系呈无色,加热去杂交体系仍呈无色,质谱检测未见信号(m/z 693).这说明胶体金纳米探针的特异性很高,可区分仅有1个碱基错配的靶目标.结论:本研究建立了一种新型的自组装双功能化胶体金纳米探针,其制备过程简单、特异性很高.此类型胶体金纳米探针在核酸分析,尤其是疾病早期诊断,寡核苷酸多态性分型等方面将有广泛的应用前景.
目的:製備一種新型的雙功能化膠體金納米探針,併攷察其特異性.方法:選擇二硫化物分子和甲型流感病毒(H1N1亞型)HA基因中特異性的23 mer寡覈苷痠片段組裝到膠體金顆粒錶麵,製成雙功能化膠體金納米探針(識彆探針,顏色呈酒紅色);利用磁性微毬作為固相支持物,偶聯另一段特異性H1N1寡覈苷痠片段製成捕捉探針;兩者與靶DNA(完全匹配DNA)結閤,形成無色的捕捉探針-靶DNA-識彆探針("三明治"夾心式複閤物),併採用基質輔助激光解析離子化飛行時間質譜(MALDI TOF MS)測定.同時,在選擇嚮體繫中分彆加入超純水(作為空白對照)、完全匹配DNA、不完全匹配DNA及2條僅有1箇堿基錯配的DNA片段作為靶目標進行實驗,觀察體繫顏色變化及質譜測定,攷察探針的特異性.結果:捕捉探針和識彆探針隻能與完全匹配DNA結閤,形成夾心式複閤物,反應體繫顏色由酒紅色轉變為無色,充分洗滌後加熱去雜交,則由無色複呈酒紅色,質譜檢測齣現信號(m/z 693);而其他靶目標(不完全匹配DNA及2條僅有1箇堿基錯配的DNA片段)和空白對照實驗,不能與2種探針形成夾心式複閤物,反應體繫均沒有顏色變化(仍呈現酒紅色),充分洗滌後體繫呈無色,加熱去雜交體繫仍呈無色,質譜檢測未見信號(m/z 693).這說明膠體金納米探針的特異性很高,可區分僅有1箇堿基錯配的靶目標.結論:本研究建立瞭一種新型的自組裝雙功能化膠體金納米探針,其製備過程簡單、特異性很高.此類型膠體金納米探針在覈痠分析,尤其是疾病早期診斷,寡覈苷痠多態性分型等方麵將有廣汎的應用前景.
목적:제비일충신형적쌍공능화효체금납미탐침,병고찰기특이성.방법:선택이류화물분자화갑형류감병독(H1N1아형)HA기인중특이성적23 mer과핵감산편단조장도효체금과립표면,제성쌍공능화효체금납미탐침(식별탐침,안색정주홍색);이용자성미구작위고상지지물,우련령일단특이성H1N1과핵감산편단제성포착탐침;량자여파DNA(완전필배DNA)결합,형성무색적포착탐침-파DNA-식별탐침("삼명치"협심식복합물),병채용기질보조격광해석리자화비행시간질보(MALDI TOF MS)측정.동시,재선택향체계중분별가입초순수(작위공백대조)、완전필배DNA、불완전필배DNA급2조부유1개감기착배적DNA편단작위파목표진행실험,관찰체계안색변화급질보측정,고찰탐침적특이성.결과:포착탐침화식별탐침지능여완전필배DNA결합,형성협심식복합물,반응체계안색유주홍색전변위무색,충분세조후가열거잡교,칙유무색복정주홍색,질보검측출현신호(m/z 693);이기타파목표(불완전필배DNA급2조부유1개감기착배적DNA편단)화공백대조실험,불능여2충탐침형성협심식복합물,반응체계균몰유안색변화(잉정현주홍색),충분세조후체계정무색,가열거잡교체계잉정무색,질보검측미견신호(m/z 693).저설명효체금납미탐침적특이성흔고,가구분부유1개감기착배적파목표.결론:본연구건립료일충신형적자조장쌍공능화효체금납미탐침,기제비과정간단、특이성흔고.차류형효체금납미탐침재핵산분석,우기시질병조기진단,과핵감산다태성분형등방면장유엄범적응용전경.
