中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2011年
20期
3741-3744
,共4页
钟声%刘丹平%刘素伟%李晓禹%李谌%李媛
鐘聲%劉丹平%劉素偉%李曉禹%李諶%李媛
종성%류단평%류소위%리효우%리심%리원
人血管内皮生长121基因%人骨形态蛋白2基因%共表达%腺病毒载体%基因治疗%基因重组
人血管內皮生長121基因%人骨形態蛋白2基因%共錶達%腺病毒載體%基因治療%基因重組
인혈관내피생장121기인%인골형태단백2기인%공표체%선병독재체%기인치료%기인중조
背景:人血管内皮生长因子121和骨形态蛋白2在激素性股骨头坏死骨缺损中均具有成血管成骨作用,目前国内在以人血管内皮生长因子121和骨形态蛋白2基因联合治疗激素性股骨头坏死方面少有报道.目的:构建人血管内皮生长因子121与人骨形态发生蛋白2双基因腺病毒穿梭质粒.方法:将质粒pShuttle-CMV-VEGF121-IRES-hrGFP-1经Kpn Ⅰ/Xba Ⅰ酶切后,将BMP2片段定向连入pShuttle-CMV- VEGF121-IRES,构建可同时表达2个目的基因重组质粒pShuttle-CMV-V EGF121-IRES-BMP2,注入H5a细胞扩增,铺板,筛选阳性菌落,提取质粒,进行酶切分析及序列测定.将已构建确认正确的腺病毒质粒,经BJ5183-AD-1电转感受态细胞进行电穿孔后,铺板,筛选阳性菌落,提取质粒,进行酶切分析,PCR检测和序列分析.结果与结论:酶切分析及核酸序列测定证实重组质粒构建正确,提示实验成功构建了血管内皮生长121及骨形态蛋白2双基因共表达重组腺病毒载体.
揹景:人血管內皮生長因子121和骨形態蛋白2在激素性股骨頭壞死骨缺損中均具有成血管成骨作用,目前國內在以人血管內皮生長因子121和骨形態蛋白2基因聯閤治療激素性股骨頭壞死方麵少有報道.目的:構建人血管內皮生長因子121與人骨形態髮生蛋白2雙基因腺病毒穿梭質粒.方法:將質粒pShuttle-CMV-VEGF121-IRES-hrGFP-1經Kpn Ⅰ/Xba Ⅰ酶切後,將BMP2片段定嚮連入pShuttle-CMV- VEGF121-IRES,構建可同時錶達2箇目的基因重組質粒pShuttle-CMV-V EGF121-IRES-BMP2,註入H5a細胞擴增,鋪闆,篩選暘性菌落,提取質粒,進行酶切分析及序列測定.將已構建確認正確的腺病毒質粒,經BJ5183-AD-1電轉感受態細胞進行電穿孔後,鋪闆,篩選暘性菌落,提取質粒,進行酶切分析,PCR檢測和序列分析.結果與結論:酶切分析及覈痠序列測定證實重組質粒構建正確,提示實驗成功構建瞭血管內皮生長121及骨形態蛋白2雙基因共錶達重組腺病毒載體.
배경:인혈관내피생장인자121화골형태단백2재격소성고골두배사골결손중균구유성혈관성골작용,목전국내재이인혈관내피생장인자121화골형태단백2기인연합치료격소성고골두배사방면소유보도.목적:구건인혈관내피생장인자121여인골형태발생단백2쌍기인선병독천사질립.방법:장질립pShuttle-CMV-VEGF121-IRES-hrGFP-1경Kpn Ⅰ/Xba Ⅰ매절후,장BMP2편단정향련입pShuttle-CMV- VEGF121-IRES,구건가동시표체2개목적기인중조질립pShuttle-CMV-V EGF121-IRES-BMP2,주입H5a세포확증,포판,사선양성균락,제취질립,진행매절분석급서렬측정.장이구건학인정학적선병독질립,경BJ5183-AD-1전전감수태세포진행전천공후,포판,사선양성균락,제취질립,진행매절분석,PCR검측화서렬분석.결과여결론:매절분석급핵산서렬측정증실중조질립구건정학,제시실험성공구건료혈관내피생장121급골형태단백2쌍기인공표체중조선병독재체.
