农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2012年
8期
915-921
,共7页
王欢欢%孙文星%徐春瑛%傅颖滢%刘红林%陈杰
王歡歡%孫文星%徐春瑛%傅穎瀅%劉紅林%陳傑
왕환환%손문성%서춘영%부영형%류홍림%진걸
成熟脂肪细胞%前体脂肪细胞%天花板培养法%去分化%再分化
成熟脂肪細胞%前體脂肪細胞%天花闆培養法%去分化%再分化
성숙지방세포%전체지방세포%천화판배양법%거분화%재분화
成熟脂肪去分化技术可为研究脂肪细胞分化提供均一的前体脂肪细胞.本研究分离培养了猪成熟脂肪细胞,并去分化为前体脂肪细胞.本实验采用Ⅱ胶原酶消化后离心分离1~3日龄仔猪(Sus scrofa)皮下脂肪组织,天花板法培养获得成熟脂肪细胞.显微镜下观察脂肪细胞去分化形态学变化,并在成脂诱导培养液的作用下诱导再分化.采用油红O染色法检测分化不同时期细胞脂滴聚集效率,脂滴的累积随诱导的进行不断增加.RT-PCR检测成熟脂肪细胞标志基因过氧化物酶体增殖物活化受体(PPARγ)和和脂肪酸结合蛋白4(FABP4)的mRNA相对表达量,分化早期基因表达水平较低,其表达水平在分化过程中持续增高,在分化后期PPARγ相对表达量与诱导分化前增加了2.8倍,FA BP4增加了约62倍(差异显著P<0.05).说明去分化获得的前体脂肪细胞在成脂诱导培养液作用下,可有效地分化为成熟脂肪细胞.本研究优化了猪成熟脂肪细胞分离和培养体系,并通过去分化获得具有再分化能力的前体脂肪细胞,为进一步深入研究猪脂肪细胞分化与代谢提供技术平台.
成熟脂肪去分化技術可為研究脂肪細胞分化提供均一的前體脂肪細胞.本研究分離培養瞭豬成熟脂肪細胞,併去分化為前體脂肪細胞.本實驗採用Ⅱ膠原酶消化後離心分離1~3日齡仔豬(Sus scrofa)皮下脂肪組織,天花闆法培養穫得成熟脂肪細胞.顯微鏡下觀察脂肪細胞去分化形態學變化,併在成脂誘導培養液的作用下誘導再分化.採用油紅O染色法檢測分化不同時期細胞脂滴聚集效率,脂滴的纍積隨誘導的進行不斷增加.RT-PCR檢測成熟脂肪細胞標誌基因過氧化物酶體增殖物活化受體(PPARγ)和和脂肪痠結閤蛋白4(FABP4)的mRNA相對錶達量,分化早期基因錶達水平較低,其錶達水平在分化過程中持續增高,在分化後期PPARγ相對錶達量與誘導分化前增加瞭2.8倍,FA BP4增加瞭約62倍(差異顯著P<0.05).說明去分化穫得的前體脂肪細胞在成脂誘導培養液作用下,可有效地分化為成熟脂肪細胞.本研究優化瞭豬成熟脂肪細胞分離和培養體繫,併通過去分化穫得具有再分化能力的前體脂肪細胞,為進一步深入研究豬脂肪細胞分化與代謝提供技術平檯.
성숙지방거분화기술가위연구지방세포분화제공균일적전체지방세포.본연구분리배양료저성숙지방세포,병거분화위전체지방세포.본실험채용Ⅱ효원매소화후리심분리1~3일령자저(Sus scrofa)피하지방조직,천화판법배양획득성숙지방세포.현미경하관찰지방세포거분화형태학변화,병재성지유도배양액적작용하유도재분화.채용유홍O염색법검측분화불동시기세포지적취집효솔,지적적루적수유도적진행불단증가.RT-PCR검측성숙지방세포표지기인과양화물매체증식물활화수체(PPARγ)화화지방산결합단백4(FABP4)적mRNA상대표체량,분화조기기인표체수평교저,기표체수평재분화과정중지속증고,재분화후기PPARγ상대표체량여유도분화전증가료2.8배,FA BP4증가료약62배(차이현저P<0.05).설명거분화획득적전체지방세포재성지유도배양액작용하,가유효지분화위성숙지방세포.본연구우화료저성숙지방세포분리화배양체계,병통과거분화획득구유재분화능력적전체지방세포,위진일보심입연구저지방세포분화여대사제공기술평태.