中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2004年
3期
202-205
,共4页
方艳辉%金玉怀%王永祥%于丹军%金士香%谢立新
方豔輝%金玉懷%王永祥%于丹軍%金士香%謝立新
방염휘%금옥부%왕영상%우단군%금사향%사립신
DNA疫苗%柯萨奇病毒(CVB)%信号肽%基因克隆%中和抗体
DNA疫苗%柯薩奇病毒(CVB)%信號肽%基因剋隆%中和抗體
DNA역묘%가살기병독(CVB)%신호태%기인극륭%중화항체
目的将人白细胞介素2(hIL-2)信号肽基因与柯萨奇病毒B组3型(CVB3) 的VP1基因融合,构建分泌型VP1真核表达质粒pcDNA3/sVP1;免疫小鼠后,通过测定血清特异性中和抗体效价及对致死量CVB3攻击的保护作用,评价疫苗的免疫效果. 方法采用重叠区基因扩增法,将hIL-2信号肽基因连同其下游11个氨基酸残基的基因与CVB3 VP1基因拼接,获得分泌型VP1(sVP1) 的基因;将sVP1基因克隆至真核表达载体pcDNA3,构建分泌型VP1真核表达质粒pcDNA3/sVP1;肌注免疫小鼠,测定血清中CVB3特异性中和抗体的效价;第3次免疫后2周,腹腔内注射1000 TCID50的CVB3,观察小鼠生存情况. 结果成功构建了分泌型VP1真核表达质粒pcDNA3/sVP1,插入的sVP1基因中含有hIL-2信号肽及其下游11个氨基酸残基的基因以及VP1基因;pcDNA3/sVP1可比对照质粒pcDNA3/VP1诱导小鼠产生更高水平的中和抗体. 结论 hIL-2信号肽基因增强了柯萨奇病毒B3型VP1 DNA疫苗诱导的中和抗体应答,为进一步研制高效的CVB3 DNA疫苗提供了实验基础.
目的將人白細胞介素2(hIL-2)信號肽基因與柯薩奇病毒B組3型(CVB3) 的VP1基因融閤,構建分泌型VP1真覈錶達質粒pcDNA3/sVP1;免疫小鼠後,通過測定血清特異性中和抗體效價及對緻死量CVB3攻擊的保護作用,評價疫苗的免疫效果. 方法採用重疊區基因擴增法,將hIL-2信號肽基因連同其下遊11箇氨基痠殘基的基因與CVB3 VP1基因拼接,穫得分泌型VP1(sVP1) 的基因;將sVP1基因剋隆至真覈錶達載體pcDNA3,構建分泌型VP1真覈錶達質粒pcDNA3/sVP1;肌註免疫小鼠,測定血清中CVB3特異性中和抗體的效價;第3次免疫後2週,腹腔內註射1000 TCID50的CVB3,觀察小鼠生存情況. 結果成功構建瞭分泌型VP1真覈錶達質粒pcDNA3/sVP1,插入的sVP1基因中含有hIL-2信號肽及其下遊11箇氨基痠殘基的基因以及VP1基因;pcDNA3/sVP1可比對照質粒pcDNA3/VP1誘導小鼠產生更高水平的中和抗體. 結論 hIL-2信號肽基因增彊瞭柯薩奇病毒B3型VP1 DNA疫苗誘導的中和抗體應答,為進一步研製高效的CVB3 DNA疫苗提供瞭實驗基礎.
목적장인백세포개소2(hIL-2)신호태기인여가살기병독B조3형(CVB3) 적VP1기인융합,구건분비형VP1진핵표체질립pcDNA3/sVP1;면역소서후,통과측정혈청특이성중화항체효개급대치사량CVB3공격적보호작용,평개역묘적면역효과. 방법채용중첩구기인확증법,장hIL-2신호태기인련동기하유11개안기산잔기적기인여CVB3 VP1기인병접,획득분비형VP1(sVP1) 적기인;장sVP1기인극륭지진핵표체재체pcDNA3,구건분비형VP1진핵표체질립pcDNA3/sVP1;기주면역소서,측정혈청중CVB3특이성중화항체적효개;제3차면역후2주,복강내주사1000 TCID50적CVB3,관찰소서생존정황. 결과성공구건료분비형VP1진핵표체질립pcDNA3/sVP1,삽입적sVP1기인중함유hIL-2신호태급기하유11개안기산잔기적기인이급VP1기인;pcDNA3/sVP1가비대조질립pcDNA3/VP1유도소서산생경고수평적중화항체. 결론 hIL-2신호태기인증강료가살기병독B3형VP1 DNA역묘유도적중화항체응답,위진일보연제고효적CVB3 DNA역묘제공료실험기출.
